Аптымізацыя працэсу чысценьня рэкомбінантнага чалавечага інсуліну

У останнія гады рост лічбы паціентаў з цукрavым дыябетам прыводзіць да павелічэння спраса на інсулін, але дасягнальны інсулін у малой колькасці. Эфектыўнае, эканамічнае вытворчасць інсуліну ёсць ключавай. Галоўным чынам вядомае як вытвораецца праз Escherichia coli (E. coli) і дзеастуючыя грибы з-за швидкага росту і нізкіх затрат, E. coli сталквается з складнымі процэсамі дaleйшай перапрацоўкі.

Агляд перапрацоўкі дaleйшай:

Чыстка рекамбінатнага чалавечага інсуліну ад тэлаў уключэння E. coli ўтрымлівае некалькі крокоў, уключаючы аднаўленне, мойку, салюбіляцыю і аксыдацыю, расінне, замена буфера, хроматаграфічную чыстку, выпаданне, рэнатурацыю, энзыматычнае расінне і фармаванне.

Yaohai Bio-Pharma мае шырокі досвед у вытворчасці і чыстцы рекамбінатнага інсуліну, разам з камандай экспертаў, забяспечваючы, што ваша вытворчасць інсуліну завершыцца з высокой эфектыўнасцю. Выкарыстоўваючы наш дасвед адсоткіх праектаў, Yaohai мільณา падзяліцца, як аптымізаваць процэс дaleйшай чысткі для рекамбінатнага чалавечага інсуліну.

Аднаўленне тэла ўключэння і мойка:

Клітыны разбіваюцца з дапамогай механічных метадаў (такіх як ультразвук, високаспрысная гомагенізацыя) ці лізазам, пасля чаго выкарыстоўваюцца мойчыя буферы (змешчалі юрею, Трітон X-100 і інш.) для адмянення няпераварных субстанцый. Пры мойцы неабходна аптымізаваць параметры, каб забеспечыць якасць белка, паўжывая на выработку.

Дысольванцыя тэла ўключэння і аксідацыя:

Выкарыстоўваюцца высокая канцэнтрацыя денатурант (такіх як гуанід гідрабрады і юрея), каб дысольваць тэла ўключэння, з дадаткам дытіотрэйтола ці β-меркаптаэтаналу, каб спрэчыць утварэнне несправільных двусульфідных звязкаў. pH і температура значна ўплываюць на реакцыі дысольванцыі і аксідацыі.

Розкіненне і замена буфера:

Разрэзанне цыянаўым брамідам выкарыстоўваецца для адцвяртання N-тэрмінальнага пачатковага амінавога кисліну, але яно мае праблемы з токсічнасцю і нізкай спецыфічнасцю. Заступленне буферу праз дыялізацыю, ультрафільтрацыю ці хроматографію па розмярach вадаляе шкодлівыя рэagensы, гатуючы прыгатаванне да наступных аперацый.

Хроматографічная чыстаць і выпаданне:

Для чыстаці іншуліну выкарыстоўваюцца розныя хроматографічныя метады, уключая афінную хроматографію, іонную хроматографію, хроматографію абваротнай фазы, хроматографію гідрофобных ўзаемадзеянняў і хроматографію па розмярach. Метады выпадання, такія як выпаданне pH і кристалізацыя мармурам, выкарыстоўваюцца для вадалення забараў і канцэнтрацыі белкаў.

Рэнатурацыя:

Расolucionны белак разбавляецца ў рэнатурацыйным буферы, каб спрыяць правільнаму фарміраванню двусольных сувязаў і складанню белка. Хроматографія ліквіда складання белка і дыялізацый таксама выкарыстоўваюцца для рэнатурацыі.

Энзымная разрэзанне і фармацыя:

Трыпсин і карбоксипептыдаза B выкарыстоўваюцца для адчынення C-пептыда, узмацаваячы актывны гетадымар инсуліну. Наконец, кристалізацыя і ліофілізацыя выкарыстоўваюцца для ўдалення залишковых соль і буфероў, падгатавляючы стабільную формуляцыю. Дадзеныя дадаткі (такія як цынк і пратамін) дадаюцца для задавання розных клінічных патрабаванняў.

Вывад:

Паслядняя перапрацоўка инсуліну з E. coli злоўжана. У майбутнім неабходна сконцэнтраваць увагу на аптымізацыі гэтых этапаў для эфектыўнага, эканамічнага вытворства, каб задаваць зап塔ў і зніжыць затраты.

Yaohai Bio-Pharma таксама акtyўна шукае глобальныя партнёраў — інстытуцыі або адзінак — і прапануе найвышчыя ва ўсьцім промысловым секторы выкуп. Калі у вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не лячас ці свяжыцеся з намі: [email protected]