Аптымізацыя працэсу ачысткі рэкамбінантныя чалавечага інсуліну

У апошнія гады рост колькасці пацыентаў з цукровым дыябетам прывёў да росту попыту на інсулін, але даступнага інсуліну не хапае. Эфектыўнае, эканамічнае вытворчасць інсуліну мае вырашальнае значэнне. У асноўным вырабляецца з дапамогай кішачнай палачкі (кішачнай палачкі) і дрожджаў з-за хуткага росту і нізкай кошту, кішачная палачка сутыкаецца са складанай далейшай перапрацоўкай.

Агляд далейшай апрацоўкі:

Ачыстка рэкамбінантнага чалавечага інсуліну з цельцаў E. coli ўключае ў сябе некалькі этапаў, уключаючы аднаўленне, прамыванне, солюбилизацию і акісленне, расшчапленне, буферны абмен, храматаграфічную ачыстку, асаджэнне, рэнатурацыю, ферментатыўнае расшчапленне і склад.

Yaohai Bio-Pharma можа пахваліцца вялікім вопытам у вытворчасці і ачыстцы рэкамбінантнага інсуліну ў спалучэнні з камандай экспертаў, якія гарантуюць высокую эфектыўнасць вытворчасці інсуліну. Выкарыстоўваючы наш вопыт сотняў праектаў, Yaohai ласкава рэзюмуе, як аптымізаваць далейшы працэс ачысткі рэкамбінантнага чалавечага інсуліну.

Ўключэнне Аднаўленне цела і мыццё:

Клеткі разбураюцца з дапамогай механічных метадаў (такіх як апрацоўка ультрагукам, гамагенізацыя пад высокім ціскам) або апрацоўкі лизоцимом з наступнай прамываннем буферамі (які змяшчае мачавіну, Triton X-100 і г.д.) для выдалення прымешак. Падчас мыцця параметры неабходна аптымізаваць, каб забяспечыць якасць бялку, адначасова кантралюючы выдаткі.

Растварэнне і акісленне цела ўключэння:

Дэнатуратары высокай канцэнтрацыі (напрыклад, гідрахларыд гуанідыну і мачавіна) выкарыстоўваюцца для растваральнасці цельцаў уключэнняў з даданнем дитиотреитола або β-меркаптоэтанола для прадухілення адукацыі няправільных дысульфідных сувязяў. pH і тэмпература значна ўплываюць на рэакцыі солюбилизации і акіслення.

Расшчапленне і буферны абмен:

Расшчапленне брамістым цыянам выкарыстоўваецца для выдалення N-канцавой ініцыятыўнай амінакіслоты, але гэта стварае праблемы таксічнасці і нізкай спецыфічнасці. З дапамогай дыялізу, ультрафільтрацыі або эксклюзійнай храматаграфіі буферны абмен выдаляе шкодныя рэагенты для падрыхтоўкі да наступных аперацый.

Храматаграфічная ачыстка і асаджэнне:

Для ачысткі інсуліну выкарыстоўваюцца розныя храматаграфічныя метады, уключаючы аффинную храматаграфію, іонаабменную храматаграфію, храматаграфію з зваротнай фазай, храматаграфію гідрафобнага ўзаемадзеяння і храматаграфію выключэння памеру. Метады асаджэння, такія як асаджэнне рн і крышталізацыя цынку, выкарыстоўваюцца для выдалення прымешак і канцэнтрацыі бялкоў.

Рэнатурацыя:

Солюбилизированный бялок разводзяць у буферы для рэнатурацыі, каб спрыяць правільнаму адукацыі дысульфідных сувязяў і згортвання бялку. Вадкасная храматаграфія з згортваннем бялку і дыяліз таксама з'яўляюцца метадамі, якія выкарыстоўваюцца для рэнатурацыі.

Ферментатыўнае расшчапленне і рэцэптура:

Трыпсінаў і карбоксипептидаза У выкарыстоўваюцца для расшчаплення С-пептыда, утвараючы гетеродимер актыўнага інсуліну. Нарэшце, крышталізацыя і лиофилизация выкарыстоўваюцца для выдалення рэшткаў соляў і буфераў, падрыхтоўкі стабільнай рэцэптуры. Спецыяльныя дадаткі (напрыклад, цынк і пратамін) дадаюцца для задавальнення розных клінічных патрэб.

Выснову:

Ніжэйшая апрацоўка інсуліну ад E. палачкі з'яўляецца складаным. У далейшым акцэнт павінен быць зроблены на аптымізацыі гэтых крокаў для эфектыўнай, эканамічнай вытворчасці для задавальнення попыту і зніжэння выдаткаў.

Yaohai Bio-Pharma таксама актыўна шукае інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў і прапануе найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас: [email protected]