Спосабы павышэння выдачы pDNA

Выработкі плазміднай ДНК (pDNA) залежыць ад генетычнай рекамбінацыі, якая ўключае падзяленне цэлевага гена і іншых элемэнтаў для стварэння кавалентна зачыненай кружалёвай структуры. Ферментацыя з выкараннем високай густасці клетак Эшерічыя колі і чысценькія працэсы — галоўныя спосабы выработкі pDNA.

Развытак лікаў на аснове клетак і генаў (CGT) і mRNA адкрыў новыя магчымасці для прадапанавання эпідэмічных хвороб і лікання рэдкіх хвороб. Праомнай выработцы CGT і mRNA патрабуецца выsoкае якасці pDNA . Таму, аптымізаваная ферментацыя E. coli і вышынка выдачы pDNA маюць ключавае значэнне для эканамічнай ефектыўнасці вакцын і лікаў на базе CGT і mRNA.

1. Узростаючы патрабальніцкі спрос на pDNA

Згодна з адзінным з дакументаў рынка вырабу плазміднай ДНК у ЗША, рынак ЦГТ прыцягнуць расты ці 7.2 мільярда USD у 2023 годзе да 23.3 мільярда USD у 2028 годзе. Прычым, геначная тэрапія стане домінуючым напрамкам ЦГТ. Узбягае колькасць ЦГТ-тэрапій, якія атрымалі санкцыю для выходу на рынак, і больш папередніх ліній заходзяць у клінічны этап. Як вынік, спрашча на пДНК расца.

Кропам на ЦГТ-тэрапіі, пДНК з'яўляецца неабходным сыр'ем для выработку вакцын mRNA. З непарвынным інавацыянным развіццём технологій mRNA ў галінах вакцынадзення ад інфекцыяных хвароб, раковых вакцын і лікання рэдкіх хвароб, спрашча на пДНК таксама будзе расти.

2. Метады павышэння выдачы пДНК

З ростам спросу на плазмідную ДНК, сённяшнія тэхналогічныя разрабоўкі сконцэнтраваныя на аптымізацыі ферментатаўных стратэгій для павышэння выдачы пДНК. Ключавыя ўмовы для развіцця веральнага працэсу уключаюць склад культурнай сярэды, температуру, pH, дысольваную кісларод (DO), спецыфічную шынтэзную частку і стратэгіі фед-бэтч.

Культурная сярэда: Культурная сярэда для ферментатаўнага ўзрошту E. coli выкарыстоўваецца ў працэсе вытвору плазмідаў, звычайна з'яўляецца паўсінтэтычнай сярэдай. Яна складаецца з карбонавых крыніц, азатных крыніц, неарганічных соль і мінімальных элементаў. Сродзіны карбона і азоту крывіяльна важныя для росту E. coli і накаплення продуктаў. Звычайнай крыніцай карбона з'яўляюцца глюкоза і гліцэраль, а азатнымі крыніцамі — органічныя і неарганічныя крыніцы азоту. Прычым, занадта вялікое адносіне карбона да азоту (C/N) можа замалюваць рост бактарыяльнага штама, а занадта малое адносіне C/N можа спрыяць быстрому росту, але абмежоўваць накапленне продукта.

Тэмпература : Аптымальная температура для росту E. coli з'яўляецца 37°C. Прыніццам, ніжэйшыя тэмпературы (30-37°C) могуць выкарыстоўвацца ў партавай ферментации, каб зменшыць максімальную удзельную шынтэзную частку, што збяльшыць рэплікацыю плазмідаў. Дла плазмідаў, якія чутлівыя да жару, павышэнне тэмпературы да 42°C можа індакаваць падвайленне колькасці копій плазміда.

pH : Аптымальная pH для росту E. coli з'яўляецца 7±0.2. pH бродзячага расолу звычайна падтрымліваецца праз насосы сур'ёза і алкалы.

Do : Крытычная канцэнтрацыя дысаванага кісняка для E. coli з'яўляецца 20%-30%. Недастатак дысаванага кісняка можа прывесці да пераваротнага вытворэння ацэтыдравой касці, што ўплывае на рост бакtéрый і навет можа спрычынаць самапараўненне бакtéрый. Пераваротны кісняк можа прывесці да отруйвання кіснякам. Факторы, якія ўплывалі на дысаваны кісняк, уключаюць хуткасць мешання, хуткасць аэрацыі і іншыя.

Стратегія партавай дачынкі : Партавая ферментация часта выбіраецца для вытвору плазмідаў. Прыніццам, гэта спрыягае дасягненню високай густасці клетак E. coli, што прыводзіць да больш агромнага біамасы, які служыць падстанкам выsoкай выдачы. Другое, чрезмерна швидкае размнажанне Escherichia coli ўплывае на стабільнасць плазмідаў. Даданне абмежаваных паліванак з дапамогай фед-бэтч можа рацыянальна кантроліраваць шыпкасць росту E. coli , тым самым павышаючы выдачу плазмідаў. Стратегія кантролю DO-stat шырока выкарыстоўваецца для рэгулявання фед-бэтч падчас ферментацыі плазмідаў. Існуе таксама даследванне, якое паказвае магчымасць выкарыстання стратегіі pH-stat.

3. Паслугі, якія праводзіць Yaohai Bio-Pharma

Yaohai Bio-Pharma розвіла сапраўдную платформу для вытвору плазмідаў. Кропка, Yaohai Bio-Pharma аптымізавала базавую культуральную сярэдзіну, кормовую сярэдзіну і стратэгію кантролю ферментацыі. У перыядзе культаў 30 гадзін выдача плазмідаў перавяшлагае 1г/Л.

Крічай, Yaohai Bio-Pharma здатная працаваць над аптымізацыяй процесу з выкарыстаннем метада адзінага чынніка ці метада планавання эксперыментаў (DoE) для розных плазмід і бактэрыяў-гаспадароў. Yaohai Bio-Pharma спяшыць сапраўдзіць пажаданні кліентаў у вялікім выходze плазмід і якасці.

Yaohai Bio-Pharma таксама актыўна шукае глобальную партыярства з інстытуцый ці адзінцаў і працягвае прапанаваць най konkurencyja спалучэнні ў галіне. Калі ёсць якія-небудзь пытанні, будзь ласка, свабодна звяртайцеся: [email protected]