Метады павышэння выхаду пДНК

Вытворчасць плазміднай ДНК (пДНК) абапіраецца на генетычную рэкамбінацыю, якая ўключае злучэнне гена-мішэні і іншых элементаў з адукацыяй кавалентна замкнёнай кругавой структуры. Ферментацыя з высокай шчыльнасцю клетак Кішачная палачка і ачыстка - асноўныя спосабы атрымання пДНК.

Развіццё клеткавай і геннай тэрапіі (КГТ) і мРНК адкрыла больш магчымасцей для прафілактыкі эпідэмічных захворванняў і лячэння рэдкіх захворванняў. Прамысловая вытворчасць CGT і мРНК патрабуе высакаякасная пДНК, Такім чынам, аптымізаванае закісанне E. палачкі і высокі выхад пДНК маюць вырашальнае значэнне для эканамічнай эфектыўнасці CGT і мРНК вакцын/лекаў.

1. Рост попыту на пДНК

Згодна са справаздачай аб рынку вытворчасці плазміднай ДНК ЗША, чакаецца, што рынак CGT вырасце з 7.2 мільярда долараў у 2023 годзе да 23.3 мільярда долараў у 2028 годзе. Акрамя таго, генная тэрапія стане дамінуючым кірункам CGT. Усё большая колькасць тэрапіі CGT зацвярджаецца для запуску на рынак, і ўсё больш канвеераў уступае ў клінічную фазу. У выніку попыт на пДНК імкліва ўзрастае.

У дадатак да тэрапіі CGT, pDNA з'яўляецца важнай сыравінай для вытворчасці мРНК-вакцын. З бесперапынным інавацыйным развіццём тэхналогіі мРНК у галіне вакцын супраць інфекцыйных хвароб, вакцын супраць раку і лячэння рэдкіх захворванняў попыт на пДНК таксама будзе хутка расці.

2. Метады павышэння выхаду пДНК

З ростам попыту на плазмідную ДНК сучасныя тэхналогіі распрацоўкі сканцэнтраваны на аптымізацыі стратэгій ферментацыі для павышэння выхаду пДНК. Асноўныя ўмовы для развіцця першапачатковага працэсу ўключаюць кампаненты культуральнай асяроддзя, тэмпературу, pH, раствораны кісларод (DO), удзельную хуткасць вытворчасці і стратэгіі перыядычнай падачы.

Культуральная асяроддзе: Пажыўная асяроддзе для закісання E. палачкі выкарыстоўваецца ў вытворчасці плазмід, як правіла, паўсінтэтычнае асяроддзе. Ён складаецца з крыніц вугляроду, крыніц азоту, неарганічных соляў і мікраэлементаў. Сярод іх тыпы крыніц вугляроду і азоту маюць вырашальнае значэнне для росту E. палачкі і назапашванне прадуктаў. Звычайна выкарыстоўваюцца крыніцы вугляроду - гэта глюкоза і гліцэрына, а крыніцы азоту ўключаюць арганічныя і неарганічныя крыніцы азоту. Акрамя таго, празмерна высокае стаўленне вугляроду да азоту (C/N) можа запаволіць рост бактэрыяльнага штаму, у той час як празмерна нізкае стаўленне C/N можа спрыяць хуткаму росту, але абмежаваць назапашванне прадукту.

тэмпература: Аптымальная тэмпература для росту E. палачкі складае 37°C. Тым не менш, больш нізкія тэмпературы (30-37 ° C) могуць быць выкарыстаны ў перыядычнай ферментацыі, каб знізіць максімальную ўдзельную хуткасць вытворчасці, такім чынам павялічваючы рэплікацыю плазмід. Для адчувальных да цяпла плазмід павышэнне тэмпературы да 42°C можа прывесці да падваення колькасці копій плазміды.

pHкаментар : Аптымальны pH для росту E. палачкі складае 7±0.2. pH ферментацыйнага булёна звычайна падтрымліваецца з дапамогай кіслотна-шчолачных помпаў.

DO: Крытычны дыяпазон канцэнтрацыі растворанага кіслароду для E. палачкі складае 20-30%. Недастатковая колькасць растворанага кіслароду можа прывесці да празмернай выпрацоўкі воцатнай кіслаты, уплываючы на ​​рост бактэрый і нават выклікаючы аўтоліз бактэрый. Залішняя колькасць растворанага кіслароду можа выклікаць кіслароднае атручванне. Фактары, якія ўплываюць на раствораны кісларод, ўключаюць хуткасць мяшання, хуткасць аэрацыі і г.д.

Fed-пакетная стратэгія: Для вытворчасці плазміды часта выбіраюць перыядычную ферментацыю з падкормкай. Па-першае, гэта спрыяе дасягненню ферментацыі з высокай шчыльнасцю клетак Кішачная палачка, у выніку чаго атрымліваецца больш біямасы, якая служыць асновай для высокай ураджайнасці. Па-другое, празмерна хуткі рост кішачнай палачкі ўплывае на стабільнасць плазміды. Даданне абмежавальных пажыўных рэчываў з выкарыстаннем перыядычнай падкормкі можа рацыянальна кантраляваць хуткасць росту E. палачкі, тым самым павялічваючы выхад плазміды. Стратэгія кантролю DO-stat звычайна выкарыстоўваецца для рэгулявання перыядычнай падкормкі падчас ферментацыі плазміды. Ёсць таксама даследаванні, якія паказваюць на мэтазгоднасць стратэгіі pH-stat.

3. Паслугі, якія прадстаўляюцца Yaohai Bio-Pharma

Yaohai Bio-Pharma распрацавала спелую платформу для вытворчасці плазмід. Акрамя таго, Yaohai Bio-Pharma аптымізавала асноўную культуральную сераду, кармавую сераду і стратэгію кантролю закісання. За 30-гадзінны цыкл культывавання выхад плазміды перавышае 1 г/л.

Акрамя таго, Yaohai Bio-Pharma можа прадастаўляць рашэнні па аптымізацыі працэсаў, заснаваныя на аднафактарных метадах або метадах дызайну эксперыментаў (DoE) для розных плазмід і бактэрый-гаспадароў. Yaohai Bio-Pharma імкнецца задаволіць патрабаванні кліентаў да высокага выхаду і якасці плазміды.

Yaohai Bio-Pharma таксама актыўна шукае інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў і прапануе найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца: [email protected]