Jämfört med den tvåstegs enzymatiska kapslingen kan enstegs co-transkriptionell kapsling avsevärt minska processflödet. Metoden är resultatorienterad och innefattar tillsats av cap-analoger till in vitro-transkriptionsreaktionen (IVT). Cap-analoger kan införas i början av transkriptionen, och mRNA med cap-struktur kan erhållas efter avslutad transkription. Nuvarande tredje generationens cap-analoger kan undvika omvänd kapning och direkt lägga till Cap 1-struktur till transkriptionsprodukten.
För överväganden om mRNA in vivo-immunogenicitet och translationseffektivitet antar IVT-processen ofta vissa typer av modifierade NTP:er, och vanliga modifierade nukleotider är pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridine (N1Ψ) och 5-metylcytosin (5mC) .
Figur: Diagram över mRNA Co-transkriptionell och täckningsreaktion
Service detaljer
Service |
Service detaljer |
Leveransperiod (arbetsdag) |
Co-transkriptionell täckning |
In vitro transkriptionssvar (Clean Cap-analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-mallborttagning (DNas I) |
IVT-tillståndsoptimering - valfritt |
Reaktionskomponentdesign och optimering |
3-7 |
Våra funktioner
- Diversifierade nukleotidmodifieringsstrategier
Flera valfria nukleotidmodifieringsstrategier kan förbättra proteinuttryck.
- Optimerat reaktionssystem
Uppnå ett högt transkriptionsförhållande och hög täckningseffektivitet.
- Stabil övertäckningsprocess
Uppnå ett tak på mer än 95 %.
- Stringent kontroll av RNase
Förhindra mRNA-nedbrytning effektivt genom att strikt kontrollera RNas i experimentmiljön och förbrukningsvaror.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma har byggt en mogen processplattform för co-transkriptionelltäckning, med användning av rena cap-analoger för att direkt lägga till Cap1-struktur samtidigt som man undviker omvänd lock. Efter standardiserad provförbehandling och detektion av kapillärelektrofores (CE) kan täckningsgraden för mRNA för förstärkt grönt fluorescerande protein (eGFP) nå mer än 95 %.
eGFP mRNA-kapslingseffektivitet på mer än 95 %
eGFP-mRNA och mCherry-mRNA som framställts genom co-transkriptionell kapning transfekteras in i 293T-celler respektive, och en stark fluorescerande signal observeras efter 48 timmar, vilket tyder på att mRNA:t uttrycks effektivt i 293T-celler.
Uttryck av eGFP-mRNA och mCherry-mRNA i 293T-cell
SV
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
