När det gäller massproduktion av mRNA är in vitro transkription (IVT) en mer effektiv och mogen metod. IVT-reaktionen antar linjäriserat plasmid-DNA innehållande T7-promotorn som mall, och mRNA syntetiseras med nukleosidtrifosfater (NTP) som substrat i närvaro av T7-RNA-polymeras.
Nukleotidmodifiering är ett genombrott i utforskningen av mRNA, där omodifierade mRNA-molekyler känns igen av intracellulära RNA-sensorer för att aktivera medfödd immunitet. För överväganden av mRNA in vivo-immunogenicitet och translationseffektivitet använder IVT-processen vanligtvis vissa typer av modifierade NTP, och vanliga modifierade nukleotider är pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) och 5-metylcytosin (5mC).
In vitro transkriptionsprocess av mRNA
In vitro transkription (IVT) reaktionsdiagram
Tjänster detaljer
Valfri tjänst | Service detaljer | Leveransperiod (arbetsdag) |
In vitro transkription (IVT) | IVT, In vitro transkription | 1 |
| Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| DNA-mallborttagning (DNas I) |
IVT-tillståndsoptimering - valfritt | IVT reaktionskomponenters design och optimering | 2-5 |
Våra funktioner
- Diversifierade nukleotidmodifieringsstrategier
Förbättra mRNA-stabilitet och proteinuttryck in vivo.
- Rigorös testdesign och optimering
mRNA-fragmentberedning upp till 10 kb kan uppnås.
Genom att optimera IVT-reaktionsförhållandena är transkriptionshastigheten upp till 1:200.
- Stringent kontroll av RNase
Stringent kontroll av RNas genom en experimentell miljö och förbrukningsvaror kan effektivt förhindra nedbrytning av mRNA.
Fallstudie
Det nuvarande IVT-reaktionssystemet är grovt optimerat för syntetiska system med en längd på cirka 100 nt, inte för mRNA av godtycklig längd. Ju längre mRNA-sekvensen är, desto svårare är den att transkribera och desto mer benägen är den för nedbrytning.
För att förbereda skräddarsydda mRNA-sekvenser med en längd på cirka 10 kb har Yaohai Bio-Pharma framgångsrikt preparerat högkvalitativa prover med ett högt transkriptionsförhållande på 1:135 och erhållit 135 μg initialt renade mRNA-produkter efter 1 μg linjäriserad plasmid transkriberades in vitro genom rigorös experimentell design, kontinuerlig optimering av reaktionsbetingelser och strikt kontroll av RNas.
mRNA Identifiera (agarosgelelektrofores)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
