5'-ändskapning är en nödvändig modifiering av mRNA. mRNAs med kapstrukturer, särskilt Cap1-strukturer, hjälper mRNAs att undvika inbyggda immunsvar in vivo, vilket leder till effektiv proteintranslation.
Enzymatisk kapning (den tvåstegs-metoden) är den konventionella metoden för mRNA-kapning, liknande kapningsprocessen hos eukaryotaorganismer. Under verkan av en serie enzym bindas 7-metylguanin (m7G) till mRNA:s 5'-ända via en 5'-5' trifosfatbindning och går sedan under methylationsmodifiering för att bildas till kapstrukturen Cap 1 (m7GpppN).
Diagram över bildningen av naturlig kapstruktur
Flödet för enzymatisk kapningsreaktion ser ut så här:
Linjär plasmid-DNA används som mall för in vitro transkription (IVT) i närvaro av T7-polymeras, och mRNA med en 5'-slutkapstruktur bildas efter en enskilt stegs reningsprocess med vaccinia-kappsningsezym och 2'-O-metyltransferas.
Servicedetaljer
Valfritt tjänstetillbud |
Tjänstdetaljer |
Leveranstid (Dag) |
mRNA enzymatisk kapning |
Enzymtisk kappsningsreaktion |
1 |
Optimering av kappsningsreaktion - valfritt |
Design och optimering av reaktionskomponenter |
3~7 |
Våra egenskaper
- Design och optimering av kappsningsreaktionskomponenten
Kappsningsreaktionskomponenten har optimerats, och produktionen av mRNA-transkriptet har ökat markant.
- Verifikation av in vitro uttryck
Den kappade mRNA:n transfekteras till 293T-celler, och uttrycket av det målprotein som kan identifieras.
Genom strikt kontroll av RNaserna i det experimentella miljön och konsumables, förhindras degraderingen av mRNA effektivt.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-plattform har byggt upp en perfekt capperingsreaktionsprocess.
För eGFP mRNA, en mRNA-preprodukt förberedd genom enzymatisk cappning, kan man observera ett högnivåerat eGFP-fluorescenssignal (grön fluorescens) 24 timmar efter transfection av 293T-cellerna, vilket identifieras genom Western Blot (WB), vilket visar att målproteinet, den förstärkta gröna fluorescerande proteinen (eGFP), kan uttryckas effektivt in vitro.
Uttryck av enzymatiskt capped eGFP mRNA i 293T-cell
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
