När det gäller massproduktion av mRNA är in vitro transkription (IVT) en mer effektiv och utvecklad metod. IVT-reaktionen använder linjärt plasmid-DNA som innehåller T7-promotorn som mall, och mRNA syntetiseras med nukleosidtrifosfat (NTP) som substrat i närvaro av T7 RNA-polymeras.
Nukleotidmodifiering är en genombrott i utforskningen av mRNA, där omodifierade mRNA-molekyler känns igen av intracellulära RNA-sensorer för att aktivera inhämtad immunförsvar. Av hänsyn till mRNA:s invivoimmunogenitetsnivå och translaterings-effektivitet använder IVT-processen vanligtvis vissa former av modifierade NTP, och vanliga modifierade nukleotider är pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) och 5-metylcytosin (5mC).
In vitro-transkriptionsprocessen av mRNA
Diagram över in vitro-transkriptionsreaktion (IVT)
Servicedetaljer
Valfritt tjänstetillbud |
Tjänstdetaljer |
Leveranstid (arbetsdag) |
In vitro transkription (IVT) |
IVT, In vitro-transkription |
1 |
| Nukleotidmodifieringar (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Borttagning av DNA-mall (DNase I) |
Optimering av IVT-villkor - valfritt |
Design och optimering av IVT-reaktionskomponenter |
2-5 |
Våra egenskaper
- Diversifierade Nukleotidmodifieringsstrategier
Förbättra mRNA-stabilitet och proteinetablering in vivo.
- Strikt testdesign och optimering
mRNA-fragmentförening upp till 10kb kan uppnås.
Genom optimering av IVT-reaktionsvillkor når transkriptionshastigheten upp till 1:200.
Strikt kontroll av RNase genom experimentell miljö och förbrukningsmaterial kan effektivt förebygga mRNA-degradering.
Fallstudie
Den aktuella IVT-reaktionssystemet är ungefär optimerat för syntetiska system med en längd på omkring 100 nt, inte för mRNAs av godtycklig längd. Ju längre mRNA-sekvensen, desto svårare är det att transkribera och desto mer benägen är den att degraderas.
För att förbereda anpassade mRNA-sekvenser med en längd på omkring 10 kb har Yaohai Bio-Pharma framgångsrikt förberett högkvalitativa prov med en hög transkriptionsförhållande på 1:135 och erhållit 135 μg av preliminärt renat mRNA-produkter efter att 1 μg av linjär plasmid transkriberats in vitro genom strikt experimentell design, kontinuerlig optimering av reaktionsvillkor och strikt kontroll av RNase.
mRNA-identifiering (Agarosgelelektrofores)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
