När det gäller batchförslag av RNA-precursorer används en vanlig metod, in vitro transkription (IVT). IVT-reaktionen använder linjärt plasmid-DNA som innehåller T7-promotor som mall och syntetiserar en RNA-precursor med nukleosidtrifosfat (NTP) som substrat i närvaro av T7 RNA-polymeras.
Metoder för in vitro cirkulering inkluderar kemisk ligation, enzymatisk ligation och permuted intron-exon (PIE)-metod. Kemisk ligation och enzymatisk ligation är lämpliga för cirkulering av kortare RNAs. När fragmentet är större än 100 nt minskar cirkuleringshastigheten starkt. I motsats till detta kan nuclease-metoden baserad på PIE-systemet uppnå cirkulering av 8 kb-sekvenser.
Under katalysen av guanosintrifosfat (GTP) går PIE-strukturen igenom cyklering av extra-intronsekvenser. Tillsammans med en rimlig strategi för att öka cykleringshastigheten kan Yaohai Bio-Pharma uppnå cyklering av sekvenser upp till 4 kb, med en cykleringseffektivitet på mer än 80%.
Den in vitro cykleringsreaktionen av RNA följer som följer:
RNA-precursorn synteseras genom in vitro-transkription, och PIE-komponenten utför själva splicingen under katalysen av GTP för att bilda circRNA.
Servicedetaljer
| Process |
Tjänstdetaljer |
Leveranstid (arbetsdag) |
| In vitro transkription och cirkulation |
Bekräftelse av reaktionssystem |
1-2 |
| In vitro transkriptions- och cykliseringsreaktioner |
| RNase R fordning |
| Reaktionsoptimering |
Reaktionsmängd, Tidsoptimering |
2-5 |
Våra egenskaper
- Strikt testdesign och optimering
Cyclisering av upp till 4 kb RNA kan uppnås.
- Hög effektivitet i cyclisering
En cycliseringshastighet på mer än 80% kan uppnås genom en rationell sekvensoptimeringsstrategi.
Genom strikt kontroll av RNaser i det experimentella miljön och konsumables förhindras RNA-degradering effektivt.
Fallstudie
In vitro-cyclisering och -föryngring av circRNA
Baseras på PIE-systemet har Yaohai Bio-Pharma optimerat circRNA-sekvensen, med en cycliseringshastighet på mer än 80% som bekräftats av agarosgelelektrofores (AGE). Genom att använda RNase R för att föryngring circRNA visar E-gel-elektroforesresultaten att den linjära RNA-prekursorn digesteras, och efter ytterligare renning tas de flesta av de nickade circRNA bort. Renningsslutet utvecklas in-house av Yaohai Bio-Pharma.
In vitro-cirkulation och -föryngring av circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
