När det gäller satsvis framställning av RNA-prekursorer är en vanlig metod in vitro-transkription (IVT). IVT-reaktionen använder linjäriserat plasmid-DNA innehållande T7-promotom som mall och syntetiserar en RNA-prekursor med nukleosidtrifosfater (NTP) som substrat i närvaro av T7-RNA-polymeras.
In vitro cykliseringsmetoder inkluderar kemisk ligering, enzymatisk ligering och permuterad intron-exon (PIE) metod. Kemisk ligering och enzymatisk ligering är lämpliga för cyklisering av kortare RNA. När fragmentet är större än 100 nt kommer cykliseringshastigheten att minska kraftigt. Däremot kan nukleasmetoden baserad på PIE-systemet uppnå cyklisering av 8 kb-sekvenser.
Under katalys av guanosintrifosfat (GTP) genomgår PIE-strukturen cyklisering av extraintronsekvenser. I kombination med en rimlig strategi för att öka cykliseringshastigheten kan Yaohai Bio-Pharma uppnå cyklisering av upp till 4 kb sekvenser, med en cykliseringseffektivitet på mer än 80 %.
In vitro cykliseringsreaktionen av RNA flyter enligt följande:
RNA-prekursorn syntetiseras genom in vitro-transkription, och PIE-komponenten fullbordar självsplitsningen under katalys av GTP för att bilda circRNA.
Tjänster detaljer
| Behandla | Service detaljer | Leveransperiod (arbetsdag) |
| In vitro transkription och cirkulation | Bekräftelse av reaktionssystem | 1-2 |
| In vitro transkriptions- och cykliseringsreaktioner |
| RNase R digestion |
| Reaktionsoptimering | Reaktionssammansättning, tidsoptimering | 2-5 |
Våra funktioner
- Rigorös testdesign och optimering
Upp till 4 kb RNA-cyklisering kan uppnås.
- Hög cykliseringseffektivitet
En cykliseringshastighet på mer än 80 % kan uppnås genom en rationell sekvensoptimeringsstrategi.
- Stringent kontroll av RNase
Genom strikt kontroll av RNaser i experimentmiljön och förbrukningsvaror förhindras RNA-nedbrytning effektivt.
Fallstudie
In vitro cyklisering och anrikning av circRNA
Baserat på PIE-systemet har Yaohai Bio-Pharma optimerat sekvensen av circRNA, med en cykliseringshastighet på mer än 80 % genom agarosgelelektrofores (AGE). Genom att använda RNase R för att berika circRNA visar E-gelelektroforesresultat att den linjära RNA-prekursorn smälts och efter ytterligare rening kan det mesta av det hackade circRNA:t avlägsnas. Reningslösningen är egenutvecklad av Yaohai Bio-Pharma.
In vitro-cirkulation och anrikning av circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
