Cellbaserade effektivitetsprov
Betydelsen av mRNA-potenssyssäkerhet
Med den snabba utvecklingen av mRNA-vacciner och terapeutiska medel krävs en specifik panel av analysmetoder för att testa potensen (som definierar deras biologiska aktivitet), vilket innefattar översättningseffektiviteten av mRNA. Dessa metoder baseras vanligtvis på celltransfektion och funktionsanalyser av målproteinet.
Yaohai Bio-Pharma erbjuder cellbaserade potenssyssäkerhetsanalyser för mRNA-drugs ämnen eller LNP-produkter, inklusive celltransfektion (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 celler, etc.) och ELISA eller Western Blotting (WB) analyser.
Regleringskrav för potenssyssäkerhetsanalyser
Enligt WHO:s regleringsöverväganden, "Potensen hos varje partiy av den slutliga vaccinet bör fastställas med hjälp av en lämplig kvantitativ och validerad funktionell metod(er). Potensprov in vitro kan inkludera cellobaserade transfectionsystem eller cellfria metoder." Och USP rekommenderade en "cellobaserad provning" för att testa potensen av mRNA, dvs. uttrycket av det målproteinet.
Analytisk metod
|
Analys
|
Metoder
|
|
Potensprövning
|
Cellobaserad transfektion och identifiering av målprotein:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 celler, etc.
|
Förfarande
Steg 1. Cellobaserad transfektion med mRNA eller mRNA-LNP
Cellerna kallas fram och transfecteras med mRNA eller mRNA-LNP. I detalj, mRNA transfecteras efter att ha blandats med en transfektionsreagens, medan mRNA-LNP direkt transfecteras till cellerna. Efter 24-48 timmar klargörs supernatanten som innehåller det exprimerade proteinet genom centrifugeringsprocessen.
Steg 2. Funktionella prövningar av målproteinet
Utför ELISA- eller WB-analyser för att utvärdera den funktionella bindningen av målproteiner.
Fallstudie
Cellerbaserade verkanstester av mRNA-prover
Yaohai-BioPharma har utvecklat en cellerbaserad verkanstestmetod för mRNA, som omfattar cellkultur, celltransfektion och proteinfunktionsanalyser. Vi transfekterade eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA och spike protein mRNA till 293T-celler och identifierade målproteiner via fluorescens, lysande eller färgsignal, WB, ELISA.
Cellerbaserade verkanstester av mRNA-produkter av Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
