Заузетост места Н-гликозилације је физиолошка карактеристика гликопротеина и углавном производи Н-гликан. Услуга анализе заузетости места Н-гликозилације компаније Иаохаи Био-Пхарма се спроводи кроз варење, ослобађање, обогаћивање и анализу коришћењем течне хроматографије-електроспреј јонизационе масене спектрометрије-масене спектрометрије (ЛЦ-ЕСИ-МС/МС).
Учествовали смо у структурној карактеризацији протеина различитих великих молекула, укључујући вакцине рекомбинантне подјединице, нанотела/ВХХ/ антитела са једним доменом (сдАбс), фрагменте антитела, хормоне/пептиде, цитокине, факторе раста (ГФ), ензиме, итд.
Регулаторни захтеви за заузетост места Н-гликозилације
Према ИЦХ К6Б смерници, „за гликопротеине се одређује садржај угљених хидрата (неутрални шећери, амино шећери и сијалинске киселине). Штавише, структура ланаца угљених хидрата, узорак олигосахарида (профил антене) и место(а) гликозилације полипептидног ланца се анализирају у најбољој могућој мери."
Аналитицал Метход
| Анализа |
Методе |
| Заузетост места Н-гликозилације |
ЛЦ-МС након дигестије дегликозилазе и протеазе |
Процедуре
1. Варење протеина протеина за стварање малих пептидних фрагмената.
2. Ослобађање Н-гликана коришћењем ендогликозидазе Х или ПНГазе Ф. Ендогликозидаза Х цепа везу између два ГлцНАц остатка у језгру Н-везаних гликана, док је ПНГасе Ф гликоамидаза која прекида везу између ГлцНАц и Асн, ослобађајући цео ланац шећера и претварање Асн у Асп са повећањем масе од 1-Да.
3. Обогаћивање Н-гликопептида путем ХИЛИЦ-а (Хидрофилна интеракцијска течна хроматографија)
4. Анализа заузетости места гликозилације везаног на Н помоћу ЛЦ-ЕСИ-МС/МС.
SR
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
