Рекомбинантни протеини често виде оксидацију изложених бочних ланаца аминокиселина, као што су триптофан (Трп) и метионин (Мет), мењајући физичко-хемијска својства протеина. Ове промене могу заузврат да допринесу промени биолошких функција захваћених протеина, као што је губитак везивања, смањење ензимске активности, неочекивано брз клиренс. Протеини су важне мете за оксидативне реакције јер брзо реагују са оксидантима и обилују ћелијама, екстрацелуларним ткивима и телесним течностима.
Стога је праћење оксидације протеина кључно за успешан развој биофармацеутике.
Иаохаи Био-Пхарма нуди услугу анализе оксидације аминокиселина, која вам омогућава да одредите оксидацију аминокиселина помоћу течне хроматографије-масене спектрометрије (ЛЦ-МС).
Били смо укључени у карактеризацију структуре протеина различитих великих молекула, укључујући вакцине рекомбинантне подјединице, нанотела/ВХХс/ антитела са једним доменом (сдАбс), фрагменте антитела, хормоне/пептиде, цитокине, факторе раста (ГФ), ензиме, итд.
Регулаторни захтеви за оксидацију аминокиселина
Према ИЦХ К6Б смерницама, оксидовани облици се могу детектовати и окарактерисати хроматографским, електрофоретским и/или другим релевантним аналитичким методама (нпр. течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ), капиларна електрофореза, масена спектроскопија, кружни дихроизам).
Аналитичке методе
| Анализа |
Методе |
| Оксидација аминокиселина |
ЛЦ-МС, течна хроматографија високих перформанси са реверзном фазом (РП-ХПЛЦ) или хроматографија са хидрофобном интеракцијом Течна хроматографија високих перформанси (ХИЦ-ХПЛЦ) и масена спектрометрија |
Аналитичке процедуре
1. Припрема узорка
2. ЛЦ-МС
КСНУМКС. Анализа података
Остаци триптофана (Трп) су посебно склони оксидацији због високе реактивности ароматичног индола са реактивним врстама кисеоника. Трп оксидација захтева извесно излагање Трп остатака који су нормално закопани у тродимензионалној структури протеина.
Међутим, када се Трп остаци оксидују, они се могу трансформисати у различите производе са веома различитим својствима од оригиналног Трп. Најчешћи пут за Трп оксидацију укључује формирање Н-формилкинуренина (разлика у маси: +32).
Друга често оксидована амино киселина је метионин. Атом сумпора у Мет остатку може да прихвати или један или два атома кисеоника који доводе до формирања сулфоксида (масена разлика: +16) или сулфона (масена разлика: +32), респективно. Ова модификација је релативно честа због типично велике површинске изложености Мет.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
