Važnost selekcije štrama
Selekcija odgovarajućih domaćina je neophodna za razvoj CMC bioloških sredstava, što određuje kvalitet i konzistentnost proizvoda i procesa proizvodnje. Direktni cilj selekcije domaćina je da se pruži kandidat za primarnu ćelijsku banku (PCB) sa visokim nivoima izražavanja i visokom stabilnošću u pogledu stabilnosti pri prolazu i čuvanju. Selekcija odgovarajućeg domaćina je neophodna iz dva osnovna razloga:
- Prvo, da se izabere mikrobiološki domaćin sa visokim nivoom izražavanja. Postoji više komercijalno dostupnih štrama koje se koriste za izražavanje različitih vrsta proteina, kao što su toksični proteini, rastvorivi proteini ili eukariotski proteini.
- Drugo, da se proveri nosač sa genetskom stabilnosti. Testiranje genetske stabilnosti je ključna tačka tokom celog životnog ciklusa proizvodnje. Predlaže se da se visoka genetska stabilnost smatra još jednom ključnom karakteristikom za prikladni štrajn.
Ključne reči: izbor mikrobiološkog štrajna, ekraniranje mikrobiološkog štrajna, visokoprerezno ekraniranje bakterija ili kvasaca, ekraniranje štrajnova sa visokim proizvodnjom, ekraniranje veoma stabilnih štrajnova, ekraniranje štrajnova sa genetskom stabilnošću Primena: ljudska medicina, veterinarska medicina, vakcine, sintetička biologija, rekombinantni veliki molekuli bioloških sredstava, biološki reagens
Usluge ekraniranja štrajnova Yaohai Bio-Pharma
Iz koristići se više od 10 godina iskustva u CDMO-u u oblasti mikrobioloških biologija, podržavamo razvoj i proizvodnju različitih velikih molekula, uključujući rekombinantne subjedinične vakcine, virusno-slične čestice (VLP), hormone (insulin, GLP-1, hormon rasta), citochine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), faktore rasta (EGF, FGF, NGF), nanotijela/Jednodomenske antitijela (sdAbs), enzime itd.
Nakupili smo bogato iskustvo u izboru različitih vrsta plazmidnih vektora i mikrobioloških domaćinstava, uključujući bakterije Escherichia coli (E. coli), i kvasina Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Možemo pronaći najbolji sistem ekspresije za vaše jedinstvene biološke sastojke.
Prikupili smo različite mikrobiološke domaćinstva sa jasnim izvorima i standardnim CoA-om, uključujući E.Coli ekspresiju bakterija i ekspresiju kvasaca.
Detalji usluge
|
Usluge
|
Detalji usluge
|
Minimalni rok izvršenja/dana
|
Isporučivi
|
|
Konstrukcija šteda (E. coli)
|
Transformacija plazmida (višestruki domaćini)
|
5
|
COA komercijalnih domaćina Izveštaj o konstrukciji šteda
|
|
PCR verifikacija
|
|
Čišćenje šteda
|
|
Konzervisanje šteda
|
|
Konstrukcija šteda (kvasac)
|
Priprema kompetentnih kvasačkih ćelija
|
10
|
|
Linearizacija plazmida
|
|
Elektro transformacija
|
|
Testiranje otpornosti / nedostatka nutritivnih sastojaka
|
|
Čišćenje šteda
|
|
Konzervisanje šteda
|
|
Testiranje prikladnog domaćina
|
Izdvajanje plazmidnog ili genomskog DNA
|
15-20
|
Proces testiranja domaćina COA inženjerskih štedova
|
|
Potvrda PCR-om, restriktivna enzima degestija
|
|
Sekvenciranje ciljnog gene
|
|
Testiranje domaćina sa visokim izrazom
|
|
Testiranje domaćina sa genetskom stabilnošću
|
|
Konzervisanje šteda
|
Studija slučaja
Prikladan domaćin povećava nivo izražavanja proteina 2,5 puta.
Dobijamo posao da razvijemo visoko produktivne E. coli štednjake. I pokušali smo tri vrste komercijalnih E. coli domaćina, na osnovu karakteristika ciljnog proteina. Pokazano je da su štednjake S1-1 i S1-2 (Fig A: Traka 1,2) poboljšale nivo proteina za 3,5 puta u odnosu na početnu štednjaku klijenta (Fig A: Traka 3).
Takođe, štednjaka S1-1 pokazuje visoku genetsku stabilnost (Fig B), i prepoznata je kao kandidat za primarno stvaranje banke stanica (PCB).
Karakteristike naših usluga
Potvrđena stručnost sa različitim mikrobiološkim domaćinima, npr., E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink štrajn1/2/3/4; S. cerevisiae i H. polymorpha .
Imamo iskustvo sa E. coli sekrekcijom periplazma, rastvorivim i izrazom uključujućih tela, kao i sa izrazom unutar plijezda ili sekretnom izrazom. Ne dodajemo antibiotike ili ih dodajemo pod regulatorijskim vodstvom.
Postavljamo platformu za visokoproduktivno testiranje kako bismo selektovali štedne i stabilne štame među preko sto kandidata.
Osigurano je da je proces inženjerstva štama i selekcije praćiv, pod Dobrom upravljanjem podacima i zapisima.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
