Važnost razvoja dolnog procesa (DSP)
Ceo fermentacioni štak sadrži ciljni protein ili plazmid, kao i nečistine povezane sa proizvodom i procesom, npr. agregati, mikrobiološka ćelijska substraća, Proteini Glavne Ćelije (HCP), DNA Glavne Ćelije (HCD), endotoksin i antibiotici.
Stoga je ključno da se dizajnuje efikasan DSP, proces čišćenja, kako bi se uklonile određene nečistine i proizvelo se visoko čisto i kvalitetno farmaceutske sredstvo. Pored toga, optimizacija procesa čišćenja može pomoći u povećanju oporavka proizvoda, smanjenju troškova i poboljšanju skalabilnosti i reprodukcibilnosti procesa.
Ključne reči: razvoj procesa, optimizacija i validacija, proces čišćenja, hromatografija, uklanjanje nepoželjnih sastojaka, uklanjanje HCP, eliminacija HCD, uklanjanje endotoksinova, denaturation proteina i refolding, montaža VLP, konjugovanje
Primena: biofarmaceutska industrija, ljudska medicina, veterinarska medicina, vakcine, rekombinantni veliki molekuli biologija, rekombinantna biologija, biološki reaktivi
DSP Rešenja od Yaohai Bio-Pharma
Imamo obiman iskustvo u izdvajanju ciljnih proteina ili plazmida iz složenih matrica putem razvoja i optimizacije procesa daljnje čišćenja. Postoji više vrsta operativnih jedinica koje su prikladne za čišćenje biologija, uključujući centrifugiranje, filtriranje, homogenizaciju, alkalnu lizu, ultrafiltraciju, šećeranje, denaturation proteina i refolding, hromatografiju itd.
Naše raspoložive usluge razvoja čišćenja uključuju:
- Razvoj celog procesa čišćenja od kolekcije stanica ili supernatanta do krajnje aktivne sastojke.
- Optimizacija procesa čišćenja na osnovu produkt-povezanih i proces-povezanih nepoželjnih tvari kako bi se povećala kvaliteta i bezbednost proizvoda, npr. HCP, HCD, endotoksin.
- Definisanje i optimizacija ključnih parametara u jednoj ili više jediničnih operacija, uključujući liženje stanica, tangencijalnu filtrasiju, testiranje rezina, hromatografiju, denaturation proteina i refolding itd.
- Optimizacija procesa u smislu kvaliteta, iznosa, oporavka, cene i skalabilnosti.
- Validacija procesa dolopovne purifikacije.
- Procena raspona parametara na osnovu rizika i dizajn eksperimenata (DoE) u modelovanju procesa.
Detalji usluge
Standardizovane platforme za purifikaciju proteina ili plazmida su bazirane na više primitivnih koraka purifikacije i manje od 4 koraka hromatografije, uključujući prikupljanje, srednju purifikaciju i poliranje.
| Detalji usluge |
Jedinične operacije |
Parametri |
| Primitivna purifikacija |
Centrifugiranje |
Brzina rotacije, Vreme |
| Homogenizacija visokim pritiskom |
Ukupan čvrsti sadržaj, pritisak, ciklusi |
| Neprekidna alkalna liza |
Odnos presušenih celija prema rešetku za lizu, vreme liše |
| Tangencijalno strujanje filtracije |
Membranski materijal i veličina pora, brzina strujanja, transmembrani pritisak (TMP), odnos zapremine filtrata prema površini membrane |
| Precipitacija |
Tip i koncentracija precipitant, aditiv, pH, temperatura, vreme |
| Denatracija i refoldiranje |
Solubilizacija proteina iz inkluzijskih tela |
Koncentracija denaturanta (npr., Urea, Guanidin HCl, Jako ionski detergent), Detergenti (npr., Sodijum dodecilsulfat, SDS), Redukujuci agenti (npr., Ditiotreitol, DTT), Helački agenti (Etilenodiamintetraasetna kiselina, EDTA), Temperatura, Vreme |
| Refoldovanje proteina |
Metode refoldovanja (razbijanje, dializa ili SEC refoldovanje), Koncentracije proteina, Buferi, pH, Temperatura, Vreme, Oksidativni i redukujuci agenti (npr., Glutatión, GSH/ Oksidirani glutation, GSSH, DTT/GSSH, Cistein/Cistin), Male molekule dodataka (L-arginin, Urea, Guanidin/HCl, i Detergenti) |
| Hvat, Srednja čišćenja i Poliranje |
AC (Afinijska hromatografija) |
Nekoliko vrsta hromatografske resine/stupca (npr., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Duljina i prečnik stupca, Sastav bufera, Zapremina za ubacivanje, Sastav mobilne faze (Adsorpcija i Desorpcija), pH, Brzina protoka, Uslovi vezivanja, pranja i eluciranja. |
| IEX (Anionska ili Kationska hromatografija) |
| HIC (Hidrofobna interakcijska hromatografija) |
| Dezaltiranje i/ili hromatografija izlučivanja po veličini (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatography) |
| MMC, Mešana režimska hromatografija |
Studija slučaja
Slučaj 1
Dobijamo posao da razvijemo i optimizujemo proces doljevezne čišćenja kako bismo povećali čistoću proteina sa 85% na 90%, istovremeno smanjujući korake hromatografije.
Yaohai je dostavio robustan i skalabilan proces čišćenja u tri koraka hromatografije za ciljni protein, bakterijsku alergiju. Konačna čistoća je dostiglih 95%.
Slučaj 2
Yaohai je bio određen od strane našeg klijenta da optimizuje proces uklanjanja endotoksinima virusnih čestica sličnih virusu (VLP) vakcine.
Naš tim je optimizovao parametre hromatografije i pripremio lek sa čistošću od 98% i ostankom endotoksina od 12.8EU/mg.
Naša iskustva
- Bili smo uključeni u razvoj i proizvodnju raznih velikih molekula, uključujući rekombinantne subjedinične vakcine, VLP-e, hormone (insulin, GLP-1, hormon rasta), citochine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), faktore rasta (EGF, FGF, NGF), nanotijela/jednodomenske antitijela (sdAbs), enzime itd.
Oprema
Koristimo industrijski vodeće sisteme AKTA Pure, AKTA Avant i Preparativni HPLC za izvršavanje različitih hromatografskih metoda, uključujući afinu, jonsku zamenu, hidrofobnu interakciju, obrnuti fazni i hromatografiju po veličini.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
