Determinarea greutății moleculare prin LC-MS
Greutatea moleculară intactă a fost întotdeauna recunoscută ca o caracteristică importantă a produselor biologice. Analiza greutății moleculare intacte este utilizată pentru a demonstra produsele proteice/peptidice și pentru a verifica substanțele biologice. Măsurarea greutății moleculei este o cerință a ghidurilor de reglementare.
Yaohai Bio-Pharma oferă analiză intactă a greutății moleculare în condiții native, reduse, N-deglicozilate. Folosim cromatografie lichidă-spectrometrie de masă (LC-MS) pentru a determina greutatea moleculară intactă.
Cerințe de reglementare pentru greutatea moleculară
Se recomandă în ICH Q6 ca „greutatea moleculară (sau dimensiunea) să fie determinată folosind cromatografia de excludere a mărimii, electroforeză pe gel SDS-poliacrilamidă (în condiții reducătoare și nereducătoare), spectrometrie de masă (MS) și alte tehnici adecvate”.
Metode de analiză
| Analiză |
Metode |
| Greutate moleculară |
LC-MS/Cromatografie lichidă/Spectrometrie de masă cu electrospray (LC/ES-MS) a proteinelor sau subunității native, reduse, N-deglicozilate |
Proceduri analitice
Greutate moleculară intactă:
- Efectuarea LC-MS pe proba nativă așa cum a fost primită.
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate moleculară redusă:
- Tratarea probei de proteină cu un agent reducător adecvat;
- Efectuarea LC-MS pe proteina redusă;
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate moleculară N-deglicozilată:
- îndepărtarea N-glicanilor cu o enzimă adecvată;
- Efectuarea LC-MS pe proteina N-deglicozilata;
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate moleculară redusă și N-deglicozilată:
- Tratarea probei de proteină cu un agent reducător adecvat;
- îndepărtarea N-glicanilor cu o enzimă adecvată;
- Efectuarea LC -MS pe proteine reduse și N-deglicozilate;
- Analiza datelor LC-MS.
Greutatea moleculară a subunității proteice:
- Clivajul subunității
- Efectuarea LC-MS pe subunitatea proteică
- Analiza datelor LC-MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
