Ocuparea locului de N-glicozilare este o caracteristică fiziologică a glicoproteinelor și produce în principal N-glican. Serviciul de analiză a ocupării site-ului de N-glicozilare al Yaohai Bio-Pharma este realizat prin digestie, eliberare, îmbogățire și analiză folosind cromatografie lichidă-spectrometrie de masă cu ionizare electrospray-spectrometrie de masă (LC-ESI-MS/MS).
Am fost implicați în caracterizarea structurală a proteinelor a diferitelor molecule mari, inclusiv vaccinuri subunități recombinante, nanocorpi/VHH/anticorpi cu un singur domeniu (sdAbs), fragmente de anticorpi, hormoni/peptide, citokine, factori de creștere (GF), enzime, colageni, etc.
Cerințe de reglementare pentru ocuparea locului de N-glicozilare
Conform ghidului ICH Q6B, „pentru glicoproteine, se determină conținutul de carbohidrați (zaharuri neutre, aminozaharuri și acizi sialici). În plus, structura lanțurilor de carbohidrați, modelul de oligozaharidă (profilul antenar) și situsurile de glicozilare ale lanțului polipeptidic sunt analizate în cea mai bună măsură posibilă.”
Metoda analitică
| Analiză |
Metode |
| ocuparea locului de N-glicozilare |
LC-MS după digestie cu glicozilază și protează |
Proceduri
1. Digestia proteinelor pentru a genera mici fragmente de peptide.
2. Eliberarea de N-glican folosind endoglicozidaza H sau PNGaza F. Endoglicozidaza H scindează legătura dintre cele două resturi de GlcNAc din miezul glicanilor N-legați, în timp ce PNGaza F este o glicoamidază care rupe legătura dintre GlcNAc și Asn, eliberând întreaga legătură. lanț de zahăr și conversia Asn în Asp cu creșterea masei de 1-Da.
3. Îmbogățirea cu N-glicopeptidă prin HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Analiza ocupării locului de glicozilare N-legat utilizând LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
