Profilarea N-glicanilor este esențială pentru producția de produse biofarmaceutice. Yaohai Bio-Pharma oferă serviciu de profilare a N-glicanilor folosind cromatografie lichidă-spectrometrie de masă (LC-MS) a glicanilor eliberați și marcați. Etapele generale pentru prepararea probei de N-glicani includ digestia glicoproteinei (GP), deglicozilarea, purificarea, marcarea/derivatizarea și extracția în fază solidă (SPE).
Am fost implicați în caracterizarea structurală a proteinelor a diferitelor molecule mari, inclusiv vaccinuri subunități recombinante, nanocorpi/VHH/anticorpi cu un singur domeniu (sdAbs), fragmente de anticorpi, hormoni/peptide, citokine, factori de creștere (GF), enzime, colageni, etc.
Cerințe de reglementare pentru profilarea N-Glycan
Conform ghidului ICH Q6B, „pentru glicoproteine, se determină conținutul de carbohidrați (zaharuri neutre, aminozaharuri și acizi sialici). În plus, structura lanțurilor de carbohidrați, modelul de oligozaharidă (profilul antenar) și situsul(le) de glicozilare ale lanțului polipeptidic sunt analizate în măsura posibilului.
Metoda analitică
| Analiză |
Metode |
| Profilarea N-glicanilor |
Analiza cromatografiei lichide-spectrometrie de masă (LC-MS) a glicanilor eliberați și marcați |
Proceduri
1. Eliberare enzimatică de glican cu peptida N-glicozidază F (PNGaza F)
2. Derivatizarea glicanilor eliberați de către 2-aminobenzamidă (2-AB)
3. Purificarea N-glicanilor recoltați pe o coloană TSK Amide - 80 dacă sunt prezente cantități mari de detergenți, săruri nevolatile sau materiale cu grupări amino libere
4. Etichetarea cu 2-aminobenzamidă fluorescentă (2-AB)
5. Analiza LC-MS a N-glicanilor marcați
6. Analiza datelor
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
