Determinarea Greutății Moleculare prin LC-MS
Greutatea moleculară netedă a fost întotdeauna recunoscută drept o caracteristică importantă a biologicelelor. Analiza greutății moleculelor netede se folosește pentru a demonstra produsele proteice/peptidice și pentru a verifica biologicele. Măsurarea greutății moleculelor este o cerere a regulilor de reglementare.
Yaohai Bio-Pharma oferă analiza greutății moleculelor netede în condiții native, reduse, N-dezglicosilate. Folosim Cromatografia Lichidă-Culorimetria de Masă (LC-MS) pentru a determina greutatea moleculară netedă.
Cerințe Regulatorii privind Greutatea Moleculară
Se recomandă în ICH Q6 că „greutatea moleculară (sau dimensiunea) este determinată folosind cromatografia pe excluzie de mărime, electrofoza în gel poliacrilamid cu SDS (sub condiții reduse și ne-reduse), spectrometria de masă (MS) și alte tehnici adecvate”.
Metode analitice
| Analiză |
Metode |
| Greutate moleculară |
LC-MS / Cromatografie lichidă/Electrospray Spectrometrie de Masă (LC/ES-MS) a proteinelor native, reduse sau N-dezglicosilate sau subunităților |
Proceduri Analitice
Greutate Moleculară Intactă:
- Realizarea LC-MS pe eșantionul nativ primit.
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate Moleculară Redusă:
- Tratarea eșantionului de proteină cu un agent reductor potrivit;
- Realizarea LC-MS pe proteină redusă;
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate Moleculară N-dezglicosilată:
- Eliminarea N-glicanelor cu un enzim potrivit;
- Efectuarea LC-MS pe proteină N-dezglicozilată;
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate moleculară a proteinei reduse și N-dezglicozilate:
- Tratarea eșantionului de proteină cu un agent reductor potrivit;
- Eliminarea N-glicanelor cu un enzim potrivit;
- Efectuarea LC-MS pe proteină redusă și N-dezglicozilată;
- Analiza datelor LC-MS.
Greutate moleculară a subunității de proteină:
- Scindarea subunității
- Efectuarea LC-MS pe subunitatea de proteină
- Analiza datelor LC-MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
