Proteinele recombinante întâlnesc adesea oxidarea lanțurilor laterale ale acidelor aminici expuse, cum ar fi tryptofanul (Trp) și metionina (Met), modificând proprietățile fizico-chimice ale proteinelor. Aceste modificări pot contribui, pe rând, la schimbarea funcțiilor biologice ale proteinelor afectate, cum ar fi pierderea legăturii, reducerea activității enzimice, sau eliminarea neașteptat rapidă. Proteinile sunt țintele importante pentru reacțiile oxidative, deoarece reacționează rapid cu oxidanții și sunt abundente în celule, tissuri extracelulare și lichide corporale.
Prin urmare, monitorizarea oxidării proteinelor este esențială pentru dezvoltarea cu succes a biotehnologielor farmaceutice.
Yaohai Bio-Pharma oferă servicii de analiză a oxidării acidelor aminici, care vă permit să determinați oxidarea acidelor aminici prin Cromatografie Liquidă-Culorimetrie de Masă (LC-MS).
Am fost implicați în Caracterizarea Structurii Proteică a diferitelor molecule mari, inclusiv Vaxine Subunitare Recombinante, Nanocorpuri/VHHs/Anitcorpi cu domeniu unic (sdAbs), Fragmente de Anitcorpuri, Hormoni/Pep tide, Cito cini, Factori de Creștere (GF), Enzime, Collagene, etc.
Cerințe Reglementare privind Oxidarea Aminoacidelor
Conform ghidelor ICH Q6B, forme oxidadă pot fi detectate și caracterizate prin metode cromatografice, electroforetice și/sau alte metode analitice relevante (de exemplu, Cromatografia Lichidă cu Performanță Înaltă (HPLC), electrofoza capilară, spectrometria de masă, dicroism circular).
Metode analitice
| Analiză |
Metode |
| Oxidare a Aminoacizilor |
LC-MS, Cromatografia Lichidă cu Performanță Înaltă pe Fază Inversă (RP-HPLC) sau Cromatografia Lichidă cu Performanță Înaltă pe Bază de Interacțiune Hidrofobică (HIC-HPLC) și spectrometria de masă |
Proceduri Analitice
1. Pregătirea eșantionului
2. LC-MS
3. Analiza datelor
Reziduurile de triptofan (Trp) sunt în special predispuse la oxidare din cauza reactivității ridicate a indolului aromatic cu specii reactive de oxigen. Oxidarea Trp necesită o anumită expunere a reziduurilor Trp care sunt, normal, ascunse în structura tridimensională a proteinului.
Cu toate acestea, atunci când reziduurile Trp sunt oxidate, acestea pot să se transforme într-o varietate de produse cu proprietăți foarte diferite față de Trp original. Cel mai comun drum pentru oxidarea Trp include formarea de N-formilkurenină (Diferență de masă: +32).
Un alt aminoacid frecvent oxidat este metionina. Atomul de sulfur din reziduu de Met poate accepta fie unul, fie doi atomi de oxigen, ceea ce duce la formarea de sulfohidru (Diferență de masă: +16) sau sulfon (Diferență de masă: +32), corespunzător. Această modificare este relativ frecventă datorită expunerii ridicate la suprafață a Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
