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mRNA의 5' 말단에 위치한 캡 구조는 진핵생물 내에서 mRNA의 효율적인 번역, 안정화 및 수송에 중추적인 역할을 합니다. 시험관 내 전사(IVT) mRNA의 맥락에서 5' 캡은 공동 전사 캡핑 또는 효소 캡핑 과정을 통해 도입됩니다. IVT RNA의 필수 구성요소인 5' 캡은 공정 개발 및 배치 출시 전반에 걸쳐 포괄적인 특성화가 필요한 중요한 품질 속성(CQA)입니다.
Yaohai-Bio Pharma는 올리고뉴클레오티드 부목(프로브) 설계, RNase H 절단, IP-RP-이온쌍 역상 고성능 액체 크로마토그래피(IP-RP-HPLC)/액체 크로마토그래피를 포함하는 포괄적인 5' 캡핑 효율성 분석 솔루션을 제공합니다. -질량 분석법(LC-MS), 데이터 분석.
WHO 규제 고려사항에 따르면, “mRNA 구조의 완전성은 mRNA 방출에 있어 중요한 품질 특성으로 간주됩니다. 따라서 mRNA 무결성, 5' 캡핑 효율성, 3' 폴리(A) 꼬리 존재 또는 길이 등에 대한 제어가 필요합니다."
분석 | 행동 양식 |
mRNA 5' 캡핑 효율 | L소화 후 C-MS |
2'-O-메틸뉴클레오타이드와 테트라데옥시리보뉴클레오타이드가 통합된 절단 프로브는 RNase H가 존재할 때 특정 위치에서 상보적인 RNA 가닥을 절단하는 역할을 합니다. 이 방법은 더 큰 RNA 단편의 표적 생성에 매우 가치가 있음이 입증되었습니다.
mRNA의 5' 말단에 상보적이도록 전략적으로 설계된 비오틴화된 프로브는 RNase H와 함께 적용되어 캡 구조를 보유하는 5' 말단 올리고뉴클레오티드의 표적 절단을 촉매합니다.
올리고뉴클레오티드 LC-MS 분석에서 선호되는 크로마토그래피 모드는 아민 이동상 첨가제를 활용하는 이온쌍 역상(IP-RP) 분리입니다. 이는 뛰어난 분해능과 질량분석기(MS)와의 호환성 때문입니다.
이인산, 삼인산 또는 메틸화되지 않은 G 캡(GpppG)이 있는 것과 달리 m7GpppG 캡을 특징으로 하는 절단 조각에서 관찰된 뚜렷한 질량은 식별을 용이하게 하고 캡핑 효율을 추정할 수 있습니다.
Yaohai-Bio Pharma는 올리고뉴클레오티드 부목(프로브) 설계, RNase H 절단, IP-RP-HPLC/LC-MS부터 데이터 분석에 이르기까지 mRNA 캡핑 효율성 분석을 위한 강력한 방법을 개발했습니다.
5' 말단 절단 단편의 전체 이온 크로마토그램(왼쪽) 및 전기분무 질량 스펙트럼(오른쪽)
Yaohai Biology는 글로벌 고객에게 원스톱 생물의약품 엔드투엔드 서비스를 제공할 수 있는 미생물 발현 시스템 CDMO 서비스 제공업체에 중점을 두고 있습니다.
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