eGFP mRNAの製造プロセス 日本

eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA の製造には、eGFP の発現をコードする機能的な RNA 分子を生成する一連の分子生物学技術が必要です。eGFP mRNA の分野で、Yaohai Bio-Pharma は顧客の特定のニーズに応える豊富な経験を蓄積してきました。その経験を活かして、EGFP mRNA を製造するためのプロセス フローを統合しました。

1. eGFP遺伝子のクローニング: eGFP をコードする遺伝子配列を取得します。この遺伝子は通常、既存のプラスミドベクターからクローン化されるか、既知のヌクレオチド配列に基づいて人工的に合成されます。クローン化された遺伝子は、正確性を保証するために配列決定によって検証されます。
2. 発現のための遺伝子最適化: ターゲット システム (例: 哺乳類細胞、細菌、または in vitro 転写システム) で最適な発現を実現するために、eGFP 遺伝子はコドン最適化を受ける場合があります。これは、元の配列内のまれなコドンを、宿主生物でより頻繁に使用されるコドンに置き換えることで、効率的な翻訳の可能性を高めることを意味します。
3. インビトロの 転写テンプレートの準備: 最適化された遺伝子が準備できたら、転写に必要な制御要素 (プロモーター配列など) を含む適切なベクター (多くの場合はプラスミド) に組み込まれます。このプラスミドは、in vitro 転写のテンプレートとして機能します。
4. インビトロの 転写: 準備したプラスミド テンプレートを使用して、in vitro 転写を行い、eGFP mRNA を合成します。このプロセスでは、プロモーター シーケンスを認識して転写を開始し、DNA テンプレートに相補的な RNA 鎖を生成する RNA ポリメラーゼ酵素を使用します。目的の用途に応じて、mRNA をキャップし、ポリアデニル化し、および/または変更して、安定性と翻訳効率を高めることができます。
5. 精製と品質管理: 合成された eGFP mRNA は、DNA、タンパク質、遊離ヌクレオチドなどの汚染物質を除去するために精製されます。精製方法には、ゲル電気泳動、カラムクロマトグラフィー、ビーズベースの分離などがあります。精製後、UV-Vis 分光光度計やゲル電気泳動などの技術を使用して、mRNA の濃度、純度、完全性などの品質が分析されます。
6. 保管と配送: 精製された eGFP mRNA は、安定性を保つために通常低温で保存されます。実験用には、特定の用途や標的細胞の種類に応じて、エレクトロポレーション、リポフェクション、ウイルスベクターなどのさまざまな方法を使用して mRNA を細胞に送達できます。
7. 表現と検証: 細胞内に入ると、eGFP mRNA は強化された緑色蛍光タンパク質に変換され、蛍光顕微鏡を使用して視覚化できます。これにより、mRNA の生成、送達、および発現が成功したかどうかを確認できます。

要約すると、eGFP mRNA の生成には、遺伝子のクローニング、発現のための最適化、in vitro 転写テンプレートの準備、転写反応の実行、結果として得られた mRNA の精製、そして最後に発現と検証のために細胞に送達することが含まれます。

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