Preparazione dei plasmidiIl grosso del lavoro consiste nel preparare veri frammenti di DNA: i plasmidi lentivirali. Questi plasmidi sono entusiasmanti perché consentono ai ricercatori di creare qualcosa chiamato vettori lentivirali Vettori lentivirali (LV) - Strumenti di laboratorio utilizzati per trasportare i geni nelle cellule. Questa tecnica è altamente utile nella ricerca e abbastanza universalmente anche per gli scopi di curare malattie dovute a problemi genetici. Altrimenti non studieresti i disturbi genetici perché a nessuno importa di aiutare un pazzo.
Plasmide lentivirus: il primo passo per creare vettori lentivirali è creare un Lentivirus Open Reading Frame. Poiché il plasmide lentivirus consente al ricercatore di aggiungere qualsiasi gene desideriGli scienziati utilizzeranno all'interno dell'esecuzione di un test. Per questo, gli scienziati utilizzano tecniche specifiche come la PCR (reazione a catena della polimerasi). Questo approccio è intercambiabile e consente di creare molte copie simili del gene a cui sono interessati. Il lentivirus è un vettore lentivirale (un piccolo tipo di RNA) che copierà il genoma dei batteri. Questi batteri cresceranno quindi in proliferazione e gli stadi di vita possono essere selezionati contemporaneamente. Infine, i batteri utilizzati per far crescere il plasmide lentivirus vengono raccolti.
Quando i plasmidi lentivirali vengono prodotti in laboratorio, gli scienziati usano molti metodi per crearli e pulirli. Ci sono molti modi per farlo, ma uno dei metodi più comuni è chiamato cromatografia su colonna. Il plasmide lentivirale viene quindi sottoposto a una fase di legame su colonna specializzata che rimuove efficacemente la maggior parte di questi elementi durante il processo. Sebbene questo sia importante perché garantisce che il plasmide possa essere trovato e purificato, non dovrebbe essere richiesto il ripristino completo dell'origine difettosa. Oppure, questo potrebbe anche essere fatto usando il metodo dell'ultracentrifugazione. In questo processo, il plasmide viene bio-filato in una centrifuga che sfrutta la separazione tra DNA e altri analoghi cellulari. Un altro metodo strumentale è l'elettroforesi su gel. Questo plasmide purificato verrà quindi utilizzato come modello per generare lentivirus, un'altra procedura durante la quale ulteriori molecole di DNA e RNA potrebbero contaminare la soluzione.
Di conseguenza, quando i ricercatori devono creare un gruppo di plasmidi lentivirali in una volta sola, è fondamentale che abbiano gli strumenti giusti e materiale sufficiente. Poiché viene utilizzato per una produzione ad alto volume, sono necessarie macchine speciali e personale in grado di operare per aumentare la velocità. In alternativa, se preferisci prendere nota di tutti gli eventi che circondano l'operazione in un quaderno, questo è essenziale anche per i tuoi futuri miglioramenti. Voglio dire che quanto sopra non include una ripartizione del materiale o una revisione passo dopo passo. Tali diritti sono anche tutelati da questi registri. Un buon controllo di qualità nel processo di produzione assicurerà un prodotto finale pulito e costante. Ciò garantisce che ogni lotto di plasmidi lentivirali debba essere della massima purezza.
Di conseguenza, prima di effettuare un esperimento con le tue cellule, gli scienziati vogliono un controllo di qualità diretto dei plasmidi lentivirali. La verifica con metodi come l'elettroforesi su gel conferma che il plasmide è pulito e intatto. Ad esempio, gli scienziati usano il test PCR per vedere se il gene che preferiscono viene rilevato nel vettore lentivirale. Eseguono anche alcuni test sui batteri per vedere che i loro plasmidi non siano stati infettati da quello. Viene trattato termicamente fino a raggiungere la fase di prodotto finale e può essere utilizzato per la ricerca in seguito, ma a causa di questa necessità di pulizia, ancora abbastanza forte da non rompersi dopo un uso prolungato, questo sarà molto simile all'ultimo di una cassaforte. Tuttavia, è qui che entra in gioco il test, poiché tutto ciò che desideri fare con i tuoi plasmidi è che funzionino alla grande e che tutto il resto non accada.
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