A magas minőségű plazmid kivonatának titkainak feloldása

A plazmid kivonása elengedhetetlen a kutatók számára. Mint génvektorok, a plazmidok fontosak a vakcina-kutatásban és a génterápiaiban, ahol a minőség döntő szerepet játszik. A kulcsminőségi tényezők közé tartozik a szuperhajlított arány és az endotoxintartalom. A szabályzatok változnak: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, <5% lineáris/nyílt-körös DNA. A vevők gyakran ≥95%-os szuperhajlított arányt preferálnak. Az endotoxin szintek: kutatás (>50 EU/µg), transzfekció (<50 EU/µg), és endotoxin-t mentes (<0.1 EU/µg).

Szuperhajlított Plazmid DNS

Az Escherichia coli-ból származó plazmidok közé tartozik a szuperhajlított (SC), nyílt-körös (OC), és lineáris (L) DNS. Magas SC arány növeli a transzfekció hatékonyságát és az exprimálást. Például, egy 85.45%-os SC plazmid transzfekciója 2.5-szer magasabb, és egy 93.28%-os SC plazmid HGF exprimációja 1.8-szer magasabb, amely megerősíti a SC DNS-szükségességét.

Nyitott-kör alakú DNA: Amikor a kétkettős DNA egyik láncja megtör, a szuperhajlított struktúra széteszik, és egy nyitott-körű plazmid keletkezik, amely nagyobb térfogattal rendelkezik, lassabban migrál az elektroforézis során, és felső helyzetben található.

Lineáris DNA: Amikor mindkét plazmid-DNA-lánc megtör, lineáris struktúra keletkezik, amely viszonylag kisebb térfogattal rendelkezik, gyorsabban migrál, mint az nyitott-körű DNA, de lassabban, mint a szuperhajlított DNA, második pozícióban helyezkedik el.

Szuperhajlított DNA: A két helix összefésül, és a DNA-helix alapján szuperhajlított struktúrába alakul. A legkisebb térfogattal rendelkezik, és gyorsabban migrál az elektroforézis során, alsó helyzetben található.

Szuperhajlított arány kvantitatív elemzése

A laboratóriumok agarosz gélforgással (AGE) és Gel-Pro Analyzer-rel vizsgálják a szuperhajlított arányt az elektroforézis képein keresztül. Egy kép 97,539%-os SC DNA-t mutat, míg egy másik 63,833%-os SC és 36,167%-os OC DNA-t (a lineáris DNA nem látható).

A plazmidok belső toxikus anyagának titka

Az endotoxina a Gram-negatív baktériumok sejt falának külső rétegének összetevője, amelyet a baktérium halála vagy lizise után adnak ki, és amely toxikus lipopoliszsaccharid A-t tartalmaz. A plazmid kivonása során az endotoxina belép a lizis oldatba, befolyásolva a transzekció hatékonyságát és nem-specifikus immunválaszt kiváltva, ami hamis pozitív eredményekhez vezethet a kísérletekben.

Endotoxina Mennyiségi és Minőségi Elemzése

A Limulus amebocyte lysate (LAL) teszt endotoxina detektálására szolgál agglutinációval a lipopoliszsaccharid (LPS) 2-keto-3-deoksioktanos sav (KDO) összetevőjével. Ez a módszer minőségi és fél-mennyiségi, az endotoxina jelenlétét koaguláció vagy színváltozás segítségével mutatja be, amikor megkeverik a mintákkal.

A Yaohai Bio-Pharma endotoxinamentes, szuperhajlított plazmidot kínál. A Yaohai feladatátvételével növekszik a transzekció és az exprimációs hatékonyság. A kézbesített plazmidoknál a ≥95%-os SC arány (átlagosan 85%±10%), és az endotoxina szintje ≤0,1, ≤0,01 vagy ≤0,005 EU/μg.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket. A legversenyképesebb kompenzációt kínáljuk az iparágban. Ha bármilyen kérdése van, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot: [email protected]