Feltárjuk a kiváló minőségű plazmidkivonás titkait

A plazmid extrakció kulcsfontosságú a kutatók számára. Génvektorként a plazmidok létfontosságúak az oltáskutatásban és a génterápiában, ahol a minőség számít. A legfontosabb minőségi tényezők közé tartozik a szuperspirált arány és az endotoxin-tartalom. A szabályozás eltérő: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, <5% lineáris/nyílt körkörös DNS-sel. Az ügyfelek gyakran előnyben részesítik a ≥95%-os szuperspirált. Az endotoxin szintek a következők: kutatási (>50 EU/µg), transzfekciós (<50 EU/µg) és endotoxin-mentes (<0.1 EU/µg).

Supercoiled plazmid DNS

Az Escherichia coli plazmidjai közé tartozik a szuperspirált (SC), nyitott körkörös (OC) és lineáris (L) DNS. A magas SC arány növeli a transzfekció hatékonyságát és expresszióját. Például egy 85.45%-os SC-plazmid transzfekciója 2.5-szer magasabb, és egy 93.28%-os SC-plazmid HGF-expressziója 1.8-szor magasabb, ami megerősíti az SC DNS felsőbbrendűségét.

Nyílt körkörös DNS: Ha a kettős szálú DNS egyik szála elszakad, a szupertekervényes szerkezet meglazul, és nyitott körkörös, nagyobb térfogatú plazmidot képez, amely a leglassabban vándorol az elektroforézis során, és a tetején helyezkedik el.

Lineáris DNS: Amikor a plazmid DNS mindkét szála elszakad, egy lineáris szerkezet alakul ki, viszonylag kisebb térfogattal, amely gyorsabban vándorol, mint a nyílt körkörös DNS, de lassabban, mint a szuperspirált DNS, és a második pozícióban helyezkedik el.

Szupertekercses DNS: Két hélix fonódik össze, és a DNS-spirálon alapuló szupertekercses szerkezetté csavarodik. Ennek van a legkisebb térfogata, és az elektroforézis során a leggyorsabban vándorol, alul helyezkedik el.

Szupertekercselési arány kvantitatív elemzése

A laboratóriumok agaróz gélelektroforézist (AGE) és Gel-Pro Analyzert használnak a szupertekercselés arányának elektroforézises képek alapján történő megítélésére. Az egyik képen 97.539% SC DNS, míg egy másikon 63.833% SC és 36.167% OC DNS látható (a lineáris DNS nem látható).

Az endotoxin titka a plazmidokban

Az endotoxin a Gram-negatív baktériumok sejtfalának külső rétegének egyik összetevője, amely baktériumok halála vagy lízise után szabadul fel, és toxikus lipopoliszacharid A-t tartalmaz. A plazmid extrakció során az endotoxin bejut a lízisoldatba, befolyásolja a transzfekció hatékonyságát és nem specifikus immunválaszt vált ki, ami hamis pozitív eredményre a kísérletekben.

Az endotoxin mennyiségi és minőségi elemzése

A Limulus amebocyte lizátum (LAL) teszt az endotoxint a lipopoliszacharidban (LPS) 2-keto-3-dezoxioktonsavval (KDO) történő agglutináció révén detektálja. Kvalitatív és félkvantitatív, jelezve az endotoxin jelenlétét koaguláción vagy színváltozáson keresztül a mintákkal keverve.

A Yaohai Bio-Pharma endotoxin-mentes szuperspirált plazmidokat kínál. A Yaohai-nak való kiszervezés növeli a transzfekció és az expresszió hatékonyságát. A szállított plazmidok SC aránya ≥95% (átlagosan 85%±10%) és endotoxin szintje ≤0.1, ≤0.01 vagy ≤0.005 EU/μg.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket is. Az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínáljuk. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]