Minőségbiztosítás és alkalmazások rekombináns fehérjékből

A rekombináns fehérjék minőségbiztosítása elengedhetetlen a kísérleti adatok megbízhatóságához és reprodukálhatóságához. Minden lépés, a projekt tervezésétől a gyártási folyamatig, szigorú minőségbiztosítási stratégiákra van szükség.

Minőségbiztosítási Stratégiák

Az ipari szektor szigorú standard műveleti eljárásokat követ, míg az akadémiai közösségnek növelnie kell a szakmai tudást azzal a céllal, hogy javítsa az adatok reprodukálhatóságát. A specifikus biológiai alkalmazásokkal vagy biochemikai jellemzőkkel rendelkező fehérjéket személyre szabott minőségbiztosítási (QC) stratégiák érvényesítik.

Kihívó Példák és Megoldások

A Yaohai Bio-Pharma bőséges tapasztalattal rendelkezik a rekombináns fehérjék gyártásában és tisztításában, valamint egy szakértőcsapatával, amely biztosítja, hogy a fehérjegyártás magas tisztasággal járul be. A százhúsz projektből származó tapasztalataink alapján a Yaohai örömmel összefoglalja, hogyan optimalizálható a fehérjétisztítás.

Nukleinsav-Kötő Fehérjék: A nukleinsav-eltávolítási lépések, például a nukleázok vagy a PEI gyorsított sedimentáció szükségesek. Az A260nm/A280nm arány figyelése érdekében a nukleinsav-kontamináció riasztást ad.

Egér Ferritin Nehéz Lánc 1 krío-EM-hez: A tisztítási lépéseket optimalizálni kell, és nukleázokat kell hozzáadni az A260nm/A280nm arány csökkentéséhez és a fehérjegyenesbűség biztosításához.

Kimerikus Fehérje Emberi dsRBEC: A sejtlyukasítás urea tartalmú búrával történik, majd oszlopos újragyűrészettel funkcionálisan aktív fehérjéket szereznek.

Divalent Kationokkal Kötődő Fehérjék: Specifikus divalent kationokat kell hozzáadni az exprimáció és a tisztítás során, és elkerülhetőknek kell lenniük a chelátáló ügynökök.

Vas-Szén Dioxid Fehérjék: Az imidazolt el kell kerülni, hogy megakadályozza a [2Fe ± 2S] feszítés zavarását, így helyes fehérjegyenesbűséget és funkciót biztosít.

LLT1 Oldható Törzs: A mutáns tervezés optimalizálja a disszulfid kötés létrejöttét és a fehérje összefonódást, amely stabil és magas hozamú fehérjéket eredményez.

CLK1 Kinasza Kristallizálás: Közös kifejezés λ-foszfataszzal eltávolítja a foszfatokat a foszforilációs helyekről, és homogén CLK1-et szereznek meg anioncseres kromatográfiával (SEC) és anions cseres kromatográfiával, hogy elkerüljék a heterogén foszforilációt.

Antigen Fehérjék Számára: Tisztaság-vizsgálat szükséges az oltóanyag-indok fehérjék kontaminációinak elkerülése érdekében. A strukturális epitóp-antitestek esetében az antigen háromdimenziós konformációja fenntartandó.

Aggregációra Tűnő Fehérjék: Olyan stratégiákat alkalmaznak, mint például másztípusok kipróbálása és a termelési hőmérséklet csökkentése, hogy korlátozzák az aggregációs problémákat, és gyors tisztítási stratégiákat terveznek ki.

Endotoxin Eltávolítása: Módszerek, mint például a pozitív töltésű kromatográfia és a polycationikus ligand-affinitási kromatográfia távolítja el az endotoxint, így biztosítják, hogy az LPS szint alul legyen a határértékekkel.

Fehérjekomplexek: A részegységek külön szintetizálva és in vitro gyüjtve vagy egyidejűleg szintetizálva jötték létre funkcionális komplexekben. A komplex integritása homogenitás és molsúly alapján értékelődik.

Következtetés

A fehérje termelés stratégiai tervezéssel kezdődik, figyelembe véve a biochemikus tulajdonságokat és alkalmazásokat. Az exprimáció, tisztítás és minőségbiztosítás folyamata során a feltételek és módszerek a stabilitás, nem-aggregáció és natív állapot optimalizálására vannak beállítva. A tisztított fehérjék számos további felhasználási célra alkalmasak, például a biofizikai jellemzéshez.

A Yaohai Bio-Pharma aktívan keresi az intézményi vagy egyéni globális partnereket, és a gazdaságban legversenyképesebb bérkeltetést ajánlja. Ha bármilyen kérdés merül fel, kérjük, látogasson el hozzánk: [email protected]