A rekombináns humán inzulin tisztítási folyamatának optimalizálása

Az elmúlt években a cukorbetegek növekedése ösztönözte az inzulinigényt, de a megfizethető inzulin hiánycikk. A hatékony, gazdaságos inzulintermelés kulcsfontosságú. A gyors növekedés és az alacsony költségek miatt főként Escherichia coli (E. coli) és élesztő útján termelt E. coli komplex feldolgozással néz szembe.

A downstream feldolgozás áttekintése:

A rekombináns humán inzulin E. coli zárványtestekből való tisztítása több lépésből áll, beleértve a kinyerést, mosást, szolubilizálást és oxidációt, hasítást, puffercserét, kromatográfiás tisztítást, kicsapást, renaturálást, enzimatikus hasítást és formulázást.

A Yaohai Bio-Pharma kiterjedt tapasztalattal büszkélkedhet a rekombináns inzulin előállításában és tisztításában, és szakértői csapattal párosulva biztosítja, hogy az Ön inzulintermelése nagy hatékonysággal fejeződjön be. Több száz projektben szerzett tapasztalatainkat felhasználva a Yaohai kedvesen összefoglalja, hogyan lehet optimalizálni a rekombináns humán inzulin downstream tisztítási folyamatát.

Inkluzív test helyreállítása és lemosása:

A sejteket mechanikai módszerekkel (például ultrahangos kezeléssel, nagynyomású homogenizálással) vagy lizozimkezeléssel roncsolják, majd mosópufferrel (karbamidot, Triton X-100-at stb. tartalmaznak) a szennyeződések eltávolítására. A mosás során a paramétereket optimalizálni kell, hogy biztosítsák a fehérje minőségét, miközben a költségeket is ellenőrizni kell.

A zárványtest oldódása és oxidációja:

A zárványtestek szolubilizálására nagy koncentrációjú denaturálószereket (például guanidin-hidrokloridot és karbamidot) használnak, amelyekhez ditiotreitolt vagy β-merkaptoetanolt adnak, hogy megakadályozzák a nem megfelelő diszulfidkötések kialakulását. A pH és a hőmérséklet jelentősen befolyásolja az oldódási és oxidációs reakciókat.

Hasítás és puffercsere:

A cianogén-bromidos hasítást az N-terminális iniciáló aminosav eltávolítására használják, de ez toxicitást és alacsony specifitási problémákat vet fel. Dialízissel, ultraszűréssel vagy méretkizárásos kromatográfiával a puffercsere eltávolítja a káros reagenseket a további műveletek előkészítéseként.

Kromatográfiás tisztítás és kicsapás:

Az inzulin tisztítására többféle kromatográfiás technikát alkalmaznak, beleértve az affinitáskromatográfiát, ioncserélő kromatográfiát, fordított fázisú kromatográfiát, hidrofób interakciós kromatográfiát és méretkizárásos kromatográfiát. A szennyeződések eltávolítására és a fehérjék koncentrálására olyan kicsapási módszereket alkalmaznak, mint a pH-kicsapás és a cinkkristályosítás.

Renaturáció:

A szolubilizált fehérjét renaturáló pufferben hígítjuk, hogy elősegítsük a diszulfid kötések helyes kialakulását és a fehérje feltekeredését. A protein-folding folyadékkromatográfia és a dialízis szintén a renaturációhoz használt módszerek.

Enzimatikus hasítás és formulázás:

Tripszint és karboxipeptidáz B-t használnak a C-peptid hasítására, így az aktív inzulin heterodimer keletkezik. Végül kristályosítást és liofilizálást alkalmaznak a maradék sók és pufferek eltávolítására, így stabil készítményt állítanak elő. Különböző klinikai igények kielégítésére speciális adalékanyagokat (például cinket és protamint) adnak hozzá.

Következtetés:

Az inzulin downstream feldolgozása a E. coli összetett. A jövőben e lépések optimalizálására kell összpontosítani a hatékony, gazdaságos termelés érdekében, az igények kielégítése és a költségek csökkentése érdekében.

A Yaohai Bio-Pharma emellett aktívan keres intézményi vagy egyéni globális partnereket, és az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínálja. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]