A rekombinánshumán inszulin tisztítási folyamatának optimalizálása

Az elmúlt években a diabetesz-betegségek növekedése az insulindemánst hatásolta, de az árkonnyű insulin rövid ellátásban van. Az efficiens, gazdaságos insulin termelés kulcsfontosságú. Főként Escherichia coli (E. coli) és kékgyillattal termelik, miattuk a gyors növekedésük és alacsony költségeik, azonban az E. coli-nak bonyolultabb a feldolgozása a termelés után.

Áttekintés a feldolgozási folyamatról:

A rekombináns emberi insulín tisztítása az E. coli inklúziós testekből több lépést tartalmaz, beleértve az elszigetelést, mosást, disszolubilizálást és oxidációt, szétválasztást, búfercserét, kromatográfiás tisztítást, precipitációt, renatúrációt, enzimatikus szétválasztást és formálást.

A Yaohai Bio-Pharma rendkívül sok tapasztalattal rendelkezik a rekombináns insulín termelésében és tisztításában, valamint szakértő csapatával biztosítja, hogy az insulín-termelés magas hatékonysággal járjon végbe. A százainak felel meg a projektjeink tapasztalatait felhasználva, a Yaohai összefoglalja, hogyan optimalizálható a Rekombináns Emberi Insulín Tisztítási Folyamata.

Beleegési test bonyolítása és mosása:

A sejtjelek mechanikai módszerekkel (például ultrahangos, magas nyomású homogenizálással) vagy lisozimmal történő megsemmisítését követően mosópuffereket (urea, Triton X-100 stb. tartalmazó) használnak az impuritások eltávolítására. A mosás során a paraméterek optimalizálása szükséges a fehérjeminőség biztosítása érdekében, miközben a költségeket is ellenőrzik.

Beleegési test disszolválása és oxidációja:

Magas koncentrációjú denatúráló anyagok (például klórfanidin-guanidin és urea) alkalmazásával disszolválják a beleegési testeket, dithiothreitol vagy β-merkaptetanol hozzáadásával megakadályozva a helytelen disszulfídkötések képződését. A pH és a hőmérséklet jelentősen befolyásolja a disszolválási és oxidációs reakciókat.

Feldarabolás és puffercsere:

A cianogénbromú felosztás használatos az N-végű kezdőaminosav eltávolítására, de gyomorbiztonsági és alacsony szpecifikussági problémákat okoz. A bértárcsere dialízissel, ultrafiltrációval vagy méret-kizáró kromatográfiával távolítja el a káros vegyületeket a következő műveletek előkészítésére.

Kromatográfiás Tisztítás és Kiesztetés:

Több kromatográfiás technika alkalmazása az insulín tisztítására, beleértve az affinitási kromatográfiát, ioncseres kromatográfiát, fordított fázisú kromatográfiát, hidrofób interakciós kromatográfiát és méret-kizáró kromatográfiát. A kiesztetési módszerek, például a pH-kiesztetés és a zinckristallizáció használatosak az impuritások eltávolítására és a fehérjék koncentrálására.

Újragyűjtés:

A disszolviált fehérje újragyűjtési bértartalékban dilálva, hogy megfelelően formálódjanak a disszulfídkötések és a fehérjegyűrűsülés. A fehérjegyűrűsülési folyamatot folyadék kromatográfiával és dialízissel is végrehajthatják.

Enzimatikus Felosztás és Formulálás:

A trypsín és a karboksipeptidáz B használatos a C-peptid levágására, amely az aktív insulín heterodimer kialakítását eredményezi. Végül, a krystallizálást és a lyofilizálást alkalmazzák az maradék sók és pufferek eltávolítására, előkészítve egy stabil formulát. Specifikus additívek (mint például a zén és a protamin) hozzávannak különböző klinikai igényeknek való megfelelés érdekében.

Következtetés:

Az insulín további feldolgozása E. coli összetett. A jövőbeli összpontosításnak ezeket a lépéseket kell optimalizálni hatékony, gazdasági termelés érdekében a kereslet teljesítéséhez és a költségek csökkentéséhez.

A Yaohai Bio-Pharma aktívan keresi az intézményi vagy egyéni globális partnereket, és a gazdaságban legversenyképesebb bérkeltetést ajánlja. Ha bármilyen kérdés merül fel, kérjük, látogasson el hozzánk: [email protected]