Az E. coli sejt integritásának optimalizálása a biotermeléshez

A biogyermekek területén az Escherichia coli (E. coli) fontos szerepet játszik a rekombináns fehérjék kifejezésének házigazdaként. Az E. coli sejt integritása döntő a fehérjegyárathoz, minőséghez és a gyártási költségekhez. Ez az integritás főként az belső membrán (IM) és a külső membrán (OM) szerkezetével és funkcióival kapcsolatos.

A Yaohai Bio-Pharma 15 éve foglalkozik E. coli fermentációval és rekombináns fehérjék kifejezésével. Különféle stratégiákat alkalmazunk az E. coli sejt integritásának fenntartására, amelynek köszönhetően a plázmid gyárata meghaladja az 1g/L-t 30 órás növényezési ciklusban. A mikrobiológiai kifejezés területén szerezett bőséges tapasztalat alapján a Yaohai Bio-Pharma több hatékony stratégiát összefoglalt arra, hogy figyelje és javítsa az E. coli sejt integritását a biogyermekek gyártása során.

Technikák az E. coli sejt integritásának figyelésére

A folyamatcytometria: Fluoreszciós színezőanyagokat használva differenciálja a sejttállapotokat, például propidium iodid-t a sejtviabilitás érzékelésére és SYTO9-et az OM átszivártságának becslésére. Azonban magas a színezők költsége és bonyolultak a műveletek.

Színes módszerek: A sejtlysis tükrözik a DNA-tartalom, enzimtevékenységek stb. érzékelésével a feloldékból, például a PicoGreen reagenskit és az alcalin foszfataszt tevékenységének vizsgálatával. Ezek a módszerek viszont bonyolultak és drágák a reagensek.

Magas teljesítményű folyadékcsatornás kromatográfia: Használatos az extraceluláris termék-konzentrációk offline érzékelésére az OM csürökletének becsléséhez. Azonban automatizálása bonyolult és hosszú az elemző idő.

Rezonancia spektroszkópiai technikák: Például a középszin- és távoli infravörös spektroszkópia, amelyek alkalmazási lehetőségeket kínálnak, de meg kell oldaniuk a spektrum-zavaró hatásokat és adatelemzési kihívásokat.

Dielektromérsz spektrum: A membrán integritását értékeli a sejtszüntetések impedanciájának mérése által, lehetővé téve a valós idejű online figyelmet. Azonban érzékeny az interferenciákra és nehéz kalibálni.

Bioszenzorok: Érzékelni tudják a sejtbeli vagy periplaszmal kifolyó vegyületeket, de olyan problémákkal küzdnek, mint a szenzorok újragenerálása.

Viszkosítás- és sűrűségmérések: Alacsony költségekkel és gyors elemzéssel járnak, de selektivitásuk hiányzik és több tétel adatát kell figyelembe venni az értékeléshez.

A sejti integritást érintő tényezők

Típusmódosítás: Változtatja az OM integritását génmódosításokkal, például lipoproteingén-mutációkkal, de hatással lehet a típus növekedésére.

Kiváltott stressz: A rekombináns fehérjék túlzott kifejezése metabolikus terhet okoz, ami befolyásolja a sejt függvényeit. Ezért szükséges a kifejezés szintjének megfelelő szabályozása.

Alapanyag ellátási sebesség: Mind a túl magas, mind a túl alacsony ellátási sebesség hatással van a sejt lisezisze és az OM integritására.

Hőmérséklet és légszivárgás: A magas hőmérséklet és az alacsony oxigén elérhetőség növeli a kifejezési stresszet illetve az OM fúvóztatást, de a konkrét hatások változhatnak.

Oszmotikusak: Ezeket hasznosítják a periplazmatikus fehérjék kiengedésére, de sértik a sejtélérzékenységet, ami korlátozza alkalmazásukat.

Következtetés: A jövőbeli kutatásoknak mélyebben kell vizsgálniuk a membránjavítás mechanizmusait és feltételeit, hogy pontosabban uralják a sejtes membránegészségügy integritását. A figyelési módszerek optimalizálása és az befolyásoló tényezők elemzése elvárhatóan javítani fogja a termék minőségét, amivel megterül a biogáz-ipar fejlődése.

Aktívan keresünk intézményi vagy egyéni globális partnereket. Az iparág legversenyképesebb teljesítményt ajánljuk. Ha bármilyen kérdés merülnek fel, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot [email protected]