Championing Reporter RNS-módosítási módszerek

A riporter-mRNS-módosítások előnyösebb módszerének kiválasztásakor nincs határozott válasz, mivel minden módszernek és riportergénnek megvannak a maga előnyei és alkalmazható forgatókönyvei. Íme néhány általános mRNS-módosítási módszer és riportergén, jellemzőikkel és alkalmasságukkal együtt.

mRNS-módosítási módszerek

Metilezés:

1. m6A: Az mRNS stabilitással, splicinggel, transzlációval és miRNS feldolgozással kapcsolatos. Az észlelési kihívások közé tartozik az antitestek kiválasztása és lokalizálása.
2. 5' Cap Nm: Növeli a stabilitást, az illesztést, a poliadenilezést és a nukleáris exportot. Segít megkülönböztetni a saját RNS-t az idegen RNS-től.
3. Pszeudouridiláció: Megváltoztatja a kodonokat, növeli a stabilitást és reagál a stresszre. Pszeudouridin szintázok katalizálják.

A nem természetes nukleotidok bemutatása:

1. A transzkripció során bevezetve kettős kémiai módosítási stratégiával. Fokozza a stabilitást, a hatékonyságot és a fehérje expressziót.

Reporter Genes

1. Green Fluorescent Protein Gene (GFP): Előnyök: Könnyen kimutatható, stabil fluoreszcens tulajdonságok, nem mérgező a sejtekre, alkalmas élő sejtes képalkotásra. Hátrányok: Korlátozott fluoreszcencia intenzitás.
2. Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP): Előnyök: Több mint 6-szor fényesebb, mint a vad típusú GFP, így alkalmasabb riportergénként a génexpresszió, -szabályozás, sejtdifferenciálódás, valamint az organizmusokon belüli fehérje lokalizáció és transzport tanulmányozására.
3. Vörös fluoreszcens fehérjék (pl. mCherry): Előnyök: Hosszabb gerjesztési és emissziós hullámhossz, ami alacsonyabb hátteret eredményez az intracelluláris képalkotás során, kiváló fluoreszcencia fényerőt és fotostabilitást, valamint alacsonyabb celluláris toxicitást. Hátrányok: Bizonyos kísérleti körülmények között nem használható olyan általánosan, mint a GFP.
4. Szentjánosbogár luciferáz: Előnyök: ATP, magnéziumionok és oxigén jelenlétében képes katalizálni a luciferin oxiluciferinné történő oxidációját, ami biolumineszcenciát bocsát ki. Alkalmas kontrollként emlőssejtekben a célgének transzlációs hatékonyságának, a sejtek életképességének és in vivo képalkotó vizsgálatoknak a tanulmányozására.

Következtetés

A riporter mRNS-módosítások előnyösebb módszerének kiválasztása a konkrét kísérleti céloktól, a kutatási háttértől és a kísérleti körülményektől függ. Ha például nagy érzékenységre van szükség, az eGFP jobb választás lehet. Ha hosszabb hullámhosszú képalkotásra van szükség a háttér interferencia csökkentése érdekében, a vörös fluoreszcens fehérjék, például az mCherry megfelelőbbek lehetnek. Ezenkívül az mRNS specifikus módosítási igényei alapján (pl. stabilitás fokozása, transzlációs hatékonyság javítása) kiválasztható a megfelelő módosítási módszer.

Nagy-Kínában az első és legnagyobb mikrobiális biológiai CRDMO-ként a Yaohai Bio-Pharma teljes körű, egyablakos személyre szabott megoldásokat vagy önálló szolgáltatásokat kínál az RNS-szintézistől, törzstervezésen és -konstrukción, upstream és downstream folyamatfejlesztésen át a GMP-ig vagy nem. -GMP szintű gyógyszerkészítmények gyártása, valamint kitöltési és befejezési szolgáltatások különféle módozatokhoz, mint például mRNS, cirRNS, plazmid RNS, rekombináns fehérjék, peptidek, enzimek, egydoménes antitestek és VLP-k emberi és állatgyógyászati ​​felhasználásra.

A Yaohai Bio-Pharma emellett aktívan keres intézményi vagy egyéni globális partnereket, és az iparág legversenyképesebb javadalmazását kínálja. Ha kérdése van, forduljon hozzánk bizalommal: [email protected]