Control de Calidad y Aplicaciones de Proteínas Recombinantes

El control de calidad de proteínas recombinantes es crucial para la fiabilidad y reproducibilidad de los datos experimentales. Cada paso, desde el diseño del proyecto hasta el proceso de producción, requiere estrategias estrictas de control de calidad.

Estrategias de Control de Calidad

El sector industrial sigue procedimientos operativos estándar estrictos, mientras que la comunidad académica necesita mejorar el conocimiento profesional para mejorar la reproducibilidad de los datos. Las proteínas con aplicaciones biológicas específicas o características bioquímicas requieren estrategias de control de calidad (QC) personalizadas.

Ejemplos Desafiantes y Soluciones

Yaohai Bio-Pharma cuenta con una amplia experiencia en la producción y purificación de proteínas recombinantes, además de un equipo de expertos, lo que garantiza que su producción de proteínas se complete con alta pureza. Con base en nuestra experiencia en cientos de proyectos, Yaohai amablemente resume cómo optimizar la purificación de proteínas.

Proteínas de Unión a Ácidos Nucleicos: Los pasos de eliminación de ácidos nucleicos, como las nucleasas o la precipitación con PEI, son necesarios. Se monitorea la relación A260nm/A280nm para detectar contaminación de ácidos nucleicos.

Feritina Pesada de Ratón Cadena 1 para microscopía electrónica criogénica: Los pasos de purificación deben optimizarse y deben añadirse nucleasas para reducir la relación A260nm/A280nm y asegurar la pureza de la proteína.

Proteína Quimérica Humana dsRBEC: La lisis celular utiliza un buffer que contiene urea, seguido por el refoldamiento en columna para obtener proteínas funcionalmente activas.

Proteínas que Enlazan Cationes Divalentes: Se deben añadir cationes divalentes específicos durante la expresión y purificación, y se deben evitar los agentes quelantes.

Proteínas de Hierro-Azufre: El imidazol debe evitarse para prevenir la alteración del clúster [2Fe ± 2S], asegurando la correcta plegadura y función de la proteína.

Fragmento Soluble de LLT1: El diseño mutante optimiza la formación de enlaces disulfuro y el plegamiento de proteínas, lo que resulta en proteínas estables y de alto rendimiento.

Cristalización de la cinasa CLK1: La co-expresión con λ-fosfatasa elimina fosfatos de los sitios de fosforilación, y se utilizan cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) y cromatografía de intercambio aniónico para obtener un CLK1 homogéneo sin fosforilación heterogénea.

Proteínas para uso como antígeno: Es necesario evaluar la pureza para evitar la contaminación con proteínas altamente inmunogénicas. Para anticuerpos de epitopos estructurales, debe mantenerse la conformación tridimensional del antígeno.

Proteínas propensas a la agregación: Se emplean estrategias como la selección de diferentes cepas y la reducción de las temperaturas de cultivo para limitar problemas de agregación, y se diseñan estrategias de purificación rápidas.

Eliminación de endotoxinas: Métodos como la cromatografía de carga positiva y la cromatografía de afinidad con ligandos policationicos eliminan endotoxinas, asegurando que los niveles de LPS estén por debajo de los límites de aplicación.

Complejos de proteínas: Los subunidades se expresan por separado y se ensamblan in vitro o se co-expresan para formar complejos funcionales. La integridad del complejo se evalúa por homogeneidad y masa molar.

Conclusión

La producción de proteínas comienza con un diseño estratégico, considerando las características bioquímicas y las aplicaciones. Durante la expresión, purificación y control de calidad, las condiciones y métodos se optimizan para la estabilidad, la no agregación y el estado nativo. Las proteínas purificadas sirven para diversos usos posteriores, como la caracterización biofísica.

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