Promoción de métodos de modificación del ARN reportero

A la hora de elegir qué método de modificación de ARNm es preferible, no hay una respuesta definitiva, ya que cada método y gen reportero tiene sus propias ventajas y situaciones aplicables. A continuación, se presentan algunos métodos de modificación de ARNm y genes reporteros comunes, junto con sus características e idoneidad.

Métodos de modificación del ARNm

Metilación:

1. m6a:Asociado con la estabilidad del ARNm, el empalme, la traducción y el procesamiento del miARN. Los desafíos de detección incluyen la selección y localización de anticuerpos.
2. 5' de límite máximo: Mejora la estabilidad, el empalme, la poliadenilación y la exportación nuclear. Ayuda a distinguir el ARN propio del ARN extraño.
3. Pseudouridilación:Altera los codones, mejora la estabilidad y responde al estrés. Catalizada por las pseudouridinas sintasas.

Introducción de nucleótidos no naturales:

1. Se introduce durante la transcripción con una estrategia de modificación química dual. Mejora la estabilidad, la eficiencia y la expresión de proteínas.

Genes reporteros

1. Gen de la proteína fluorescente verde (GFP)Ventajas: Fácil de detectar, propiedades de fluorescencia estables, no tóxico para las células, adecuado para la obtención de imágenes de células vivas. Desventajas: Intensidad de fluorescencia limitada.
2. Proteína fluorescente verde mejorada (eGFP):Ventajas: Es más de 6 veces más brillante que el GFP de tipo salvaje, lo que lo hace más adecuado como gen reportero para estudiar la expresión genética, la regulación, la diferenciación celular y la localización y el transporte de proteínas dentro de los organismos.
3. Proteínas fluorescentes rojas (por ejemplo, mCherry)Ventajas: Longitudes de onda de excitación y emisión más largas, lo que da como resultado un fondo más bajo durante la obtención de imágenes intracelulares, excelente brillo de fluorescencia y fotoestabilidad, y menor toxicidad celular. Desventajas: Puede que no se utilice tan comúnmente como la GFP en ciertas condiciones experimentales.
4. Luciferasa de luciérnagaVentajas: En presencia de ATP, iones de magnesio y oxígeno, puede catalizar la oxidación de la luciferina en oxiluciferina, emitiendo bioluminiscencia. Es adecuado para su uso como control para estudiar la eficiencia de traducción de genes diana en células de mamíferos, la viabilidad celular y los ensayos de imágenes in vivo.

Conclusión

A la hora de elegir qué método de modificación del ARNm reportero es preferible, se depende de los objetivos experimentales específicos, los antecedentes de investigación y las condiciones experimentales. Por ejemplo, si se requiere una alta sensibilidad, la eGFP puede ser una mejor opción. Si se necesitan imágenes a longitudes de onda más largas para reducir la interferencia de fondo, las proteínas fluorescentes rojas como mCherry pueden ser más adecuadas. Además, en función de las necesidades de modificación específicas del ARNm (por ejemplo, mejorar la estabilidad, mejorar la eficiencia de la traducción), se puede seleccionar el método de modificación correspondiente.

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