Kontrola kvality a aplikace rekombinantních proteinů

Kontrola kvality rekombinantních proteinů je zásadní pro spolehlivost a reprodukovatelnost experimentálních dat. Každý krok, od návrhu projektu až po výrobní proces, vyžaduje přísné strategie kontroly kvality.

Strategie kontroly kvality

Průmyslový sektor dodržuje přísné standardní provozní postupy, zatímco akademická komunita potřebuje rozšířit odborné znalosti, aby zlepšila reprodukovatelnost dat. Proteiny se specifickými biologickými aplikacemi nebo biochemickými vlastnostmi vyžadují přizpůsobené strategie kontroly kvality (QC).

Náročné příklady a řešení

Yaohai Bio-Pharma se může pochlubit rozsáhlými zkušenostmi s produkcí a čištěním rekombinantních proteinů ve spojení s týmem odborníků, kteří zajišťují, že vaše produkce proteinů bude dokončena s vysokou čistotou. Yaohai s využitím našich zkušeností ze stovek projektů laskavě shrnuje, jak optimalizovat čištění proteinů.

Proteiny vázající nukleové kyseliny: Kroky odstranění nukleových kyselin, jako jsou nukleázy nebo srážení PEI, jsou nezbytné. Poměr A260nm/A280nm je monitorován pro detekci kontaminace nukleovými kyselinami.

Myš Ferritin Heavy Chain 1 pro cryo-EM: Je třeba optimalizovat kroky čištění a přidat nukleázy, aby se snížil poměr A260nm/A280nm a zajistila se čistota proteinu.

Chimérický protein pro lidský dsRBEC: Buněčná lýza používá pufr obsahující močovinu, po kterém následuje refolding na koloně za účelem získání funkčně aktivních proteinů.

Proteiny vázající dvojmocné kationty: Během exprese a purifikace musí být přidány specifické dvojmocné kationty a je třeba se vyhnout chelatačním činidlům.

Železo-sírové proteiny: Imidazolu je třeba se vyhnout, aby se zabránilo narušení klastru [2Fe ± 2S] a zajistilo se správné skládání a funkce proteinu.

Rozpustný fragment LLT1: Mutantní design optimalizuje tvorbu disulfidových vazeb a skládání proteinů, což vede ke stabilním a vysoce výtěžným proteinům.

Krystalizace kinázy CLK1: Koexprese s λ-fosfatázou odstraňuje fosfáty z fosforylačních míst a k získání homogenní CLK1 bez heterogenní fosforylace se používá vylučovací chromatografie (SEC) a aniontoměničová chromatografie.

Proteiny pro použití s ​​antigenem: Hodnocení čistoty je nezbytné, aby se zabránilo kontaminaci vysoce imunogenními proteiny. Pro strukturální epitopové protilátky musí být zachována trojrozměrná konformace antigenu.

Proteiny náchylné k agregaci: K omezení problémů s agregací se používají strategie jako screening různých kmenů a snižování kultivačních teplot a jsou navrženy strategie rychlé purifikace.

Odstranění endotoxinu: Metody, jako je chromatografie s pozitivním nábojem a afinitní chromatografie s polykationtovým ligandem, odstraňují endotoxiny a zajišťují, že hladiny LPS jsou pod aplikačními limity.

Proteinové komplexy: Podjednotky jsou exprimovány odděleně a sestaveny in vitro nebo koexprimovány za vzniku funkčních komplexů. Integrita komplexu se hodnotí podle homogenity a molární hmotnosti.

Proč investovat do čističky vzduchu?

Produkce bílkovin začíná strategickým návrhem, s ohledem na biochemické vlastnosti a aplikace. Během exprese, purifikace a QC jsou podmínky a metody optimalizovány pro stabilitu, neagregaci a nativní stav. Purifikované proteiny slouží různým následným účelům, jako je biofyzikální charakterizace.

Yaohai Bio-Pharma také aktivně hledá institucionální nebo individuální globální partnery a nabízí nejkonkurenceschopnější kompenzaci v oboru. Máte-li jakékoli dotazy, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]