Kontrola kvality a aplikace rekombinantních bílkovin

Kontrola kvality rekombinovaných bílkovin je klíčová pro spolehlivost a reprodukovatelnost experimentálních dat. Každý krok, od návrhu projektu po výrobní proces, vyžaduje přísné strategie kontroly kvality.

Strategie kontroly kvality

Průmyslový sektor dodržuje přísné standardizované operační postupy, zatímco akademická komunita potřebuje rozvíjet profesionální znalosti pro zlepšení reprodukovatelnosti dat. Bílkoviny se specifickými biologickými aplikacemi nebo biochemickými vlastnostmi vyžadují přizpůsobené strategie kontroly kvality (QC).

Náročné příklady a řešení

Yaohai Bio-Pharma disponuje širokou zkušeností s produkcí a čištěním rekombinovaných bílkovin, dále na to spojenou s týmem odborníků, což zaručuje, že vaše produkce bílkovin bude dokončena s vysokou čistotou. Na základě zkušeností z stovek projektů laskavě shrnuje Yaohai, jak optimalizovat čištění bílkovin.

Bílkoviny vázané na nukleové kyseliny: Kroky odstranění nukleových kyselin, jako jsou nukleázy nebo PEI precipitace, jsou nezbytné. Poměr A260nm/A280nm je sledován pro detekci kontaminace nukleovými kyselinami.

Ferritin těžká řetěz 1 u myši pro kryo-EM: Kroky očišťování musí být optimalizovány a musí být přidány nukleázy pro snížení poměru A260nm/A280nm a zajištění čistoty proteinu.

Chimérický protein lidský dsRBEC: Lýze buněk používá bakteriální mediální pevný fázový systém s úplným refaldováním na sloupci pro získání funkčně aktivních proteinů.

Proteiny vážící divalenty kationty: Během expresce a očišťování musí být přidány specifické divalentní kationty a chelátory se musejí vyhýbat.

Železovodíkové proteiny: Imidazol by měl být vynechán kvůli prevenci rušení [2Fe ± 2S] klastru, aby se zajistilo správné složení a funkce proteinu.

rozpustný fragment LLT1: Mutantní design optimalizuje tvorbu disulfidových vazeb a proteinového sčítání, což vede ke stabilním proteinům s vysokým výnosem.

Kryštalizace kinázy CLK1: Koexprimace s λ-fosfatasou odebírá fosfát z fosforylačních míst a velikostní exluze chromatografie (SEC) a aniontová výměnná chromatografie se používají k získání homogenního CLK1 bez heterogenní fosforylace.

Proteiny pro antigenické účely: Posouzení čistoty je nutné k vyhnutí se kontaminaci vysoky imunogenity proteiny. Pro strukturní epitopové antitěla musí být zachována třírozměrná konformace antigenu.

Proteiny náchylné k agregaci: Používají se strategie jako testování různých šťáv a snižování teplot pěstby k omezení problémů s agregací a navrhuje se rychlá purifikace.

Odstranění endotoxinů: Metody jako pozitivně nabité chromatografie a afinitní chromatografie polycationtového ligandu odstraňují endotoxiny, aby byly úrovně LPS pod limity aplikace.

Proteinové komplexy: Podjednotky jsou vyjádřeny odděleně a montované in vitro nebo společně vyjádřené k vytvoření funkčních komplexů. Integrita komplexu je posuzována podle homogenity a molární hmotnosti.

Závěr

Produkce bílkovin začíná strategickým návrhem, přičemž se berou v úvahu biochemické vlastnosti a aplikace. Během expresní fáze, čištění a kvalitní kontroly jsou podmínky a metody optimalizovány pro stabilitu, nepropojování a původní stav. Čištěné bílkoviny slouží různým dalším použitím, jako je biofyzikální charakterizace.

Yaohai Bio-Pharma aktivně hledá globální partnery, jak institucionální, tak individuální, a nabízí nejvyšší odměny v odvětví. Pokud máte jakékoliv otázky, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]