Optimalizace procesu čištění pro rekombinantní lidský inzulín

V posledních letech poptávku po inzulínu řídil růst pacientů s cukrovkou, ale cenově dostupného inzulínu je nedostatek. Efektivní a ekonomická produkce inzulínu je zásadní. E. coli je produkována hlavně prostřednictvím Escherichia coli (E. coli) a kvasinek díky rychlému růstu a nízkým nákladům, čelí složitému následnému zpracování.

Přehled následného zpracování:

Čištění rekombinantního lidského inzulínu z inkluzních tělísek E. coli zahrnuje několik kroků, včetně izolace, promývání, solubilizace a oxidace, štěpení, výměny pufru, chromatografického čištění, srážení, renaturace, enzymatického štěpení a formulace.

Yaohai Bio-Pharma se může pochlubit rozsáhlými zkušenostmi s produkcí a čištěním rekombinantního inzulínu ve spojení s týmem odborníků, kteří zajišťují, že vaše produkce inzulínu bude dokončena s vysokou účinností. Yaohai s využitím našich zkušeností ze stovek projektů laskavě shrnuje, jak optimalizovat downstream purifikační proces pro rekombinantní lidský inzulín.

Inclusion Body Recovery and Washing:

Buňky jsou rozrušeny pomocí mechanických metod (jako je ultrazvuk, vysokotlaká homogenizace) nebo ošetření lysozymem, po kterém následují promývací pufry (obsahující močovinu, Triton X-100 atd.), aby se odstranily nečistoty. Během praní je třeba optimalizovat parametry, aby byla zajištěna kvalita bílkovin a zároveň byly kontrolovány náklady.

Solubilizace a oxidace inkluzního těla:

K solubilizaci inkluzních tělísek se používají denaturační látky s vysokou koncentrací (jako je guanidin hydrochlorid a močovina), s přidáním dithiothreitolu nebo β-merkaptoethanolu, aby se zabránilo tvorbě nesprávných disulfidových vazeb. pH a teplota významně ovlivňují solubilizační a oxidační reakce.

Štěpení a výměna pufru:

Štěpení bromkyanem se používá k odstranění N-koncové iniciační aminokyseliny, ale představuje toxicitu a problémy s nízkou specifitou. Prostřednictvím dialýzy, ultrafiltrace nebo vylučovací chromatografie odstraňuje výměna pufru škodlivá činidla při přípravě na následné operace.

Chromatografické čištění a srážení:

K čištění inzulínu se používá více chromatografických technik, včetně afinitní chromatografie, iontoměničové chromatografie, chromatografie na reverzní fázi, chromatografie s hydrofobní interakcí a vylučovací chromatografie. K odstranění nečistot a zahuštění proteinů se používají srážecí metody, jako je srážení pH a krystalizace zinku.

renaturace:

Solubilizovaný protein se zředí v renaturačním pufru, aby se podpořila správná tvorba disulfidových vazeb a skládání proteinu. Pro renaturaci se také používá kapalinová chromatografie skládající se z proteinů a dialýza.

Enzymatické štěpení a složení:

Trypsin a karboxypeptidáza B se používají ke štěpení C-peptidu za vzniku aktivního heterodimeru inzulínu. Nakonec se krystalizace a lyofilizace použijí k odstranění zbytkových solí a pufrů, čímž se připraví stabilní formulace. Specifická aditiva (jako je zinek a protamin) se přidávají za účelem splnění různých klinických potřeb.

Závěr:

Následné zpracování inzulínu z E. coli je komplexní. Budoucí pozornost by se měla zaměřit na optimalizaci těchto kroků pro účinnou, ekonomickou výrobu, aby uspokojila poptávku a snížila náklady.

Yaohai Bio-Pharma také aktivně hledá institucionální nebo individuální globální partnery a nabízí nejkonkurenceschopnější kompenzaci v oboru. Máte-li jakékoli dotazy, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]