Championing Reporter RNA modifikační metody

Při volbě, která metoda modifikací reportérové ​​mRNA je výhodnější, neexistuje žádná definitivní odpověď, protože každá metoda a reportérový gen má své vlastní výhody a použitelné scénáře. Zde jsou některé běžné metody modifikace mRNA a reportérové ​​geny spolu s jejich charakteristikami a vhodností.

Metody modifikace mRNA

Methylace:

1. m6A: Souvisí se stabilitou mRNA, sestřihem, translací a zpracováním miRNA. Mezi detekční výzvy patří výběr a lokalizace protilátek.
2. 5' Cap Nm: Zvyšuje stabilitu, spojování, polyadenylaci a jaderný export. Pomáhá odlišit vlastní RNA od cizí RNA.
3. Pseudouridylace: Mění kodony, zvyšuje stabilitu a reaguje na stres. Katalyzováno pseudouridinsyntázami.

Představení nepřirozených nukleotidů:

1. Zavedeno během transkripce se strategií dvojí chemické modifikace. Zvyšuje stabilitu, účinnost a expresi proteinů.

Reportér Genes

1. Gen zeleného fluorescenčního proteinu (GFP): Výhody: Snadná detekce, stabilní fluorescenční vlastnosti, netoxický pro buňky, vhodný pro zobrazování živých buněk. Nevýhody: Omezená intenzita fluorescence.
2. Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP): Výhody: Více než 6krát jasnější než GFP divokého typu, díky čemuž je vhodnější jako reportérový gen pro studium genové exprese, regulace, buněčné diferenciace a lokalizace a transportu proteinů v organismech.
3. Červené fluorescenční proteiny (např. mCherry): Výhody: Delší vlnové délky excitace a emise, což má za následek nižší pozadí během intracelulárního zobrazování, vynikající jas fluorescence a fotostabilitu a nižší buněčnou toxicitu. Nevýhody: V určitých experimentálních podmínkách nemusí být tak běžně používán jako GFP.
4. Luciferáza světlušky: Výhody: V přítomnosti ATP, iontů hořčíku a kyslíku může katalyzovat oxidaci luciferinu na oxyluciferin, přičemž dochází k bioluminiscenci. Je vhodný pro použití jako kontrola pro studium účinnosti translace cílových genů v savčích buňkách, životaschopnosti buněk a in vivo zobrazovacích testů.

Proč investovat do čističky vzduchu?

Při výběru, který způsob modifikace reportérové ​​mRNA je výhodnější, závisí na konkrétních experimentálních cílech, pozadí výzkumu a experimentálních podmínkách. Pokud je například vyžadována vysoká citlivost, může být eGFP lepší volbou. Pokud je ke snížení interference pozadí potřeba zobrazení na delších vlnových délkách, mohou být vhodnější červené fluorescenční proteiny jako mCherry. Navíc, na základě specifických potřeb modifikace mRNA (např. zvýšení stability, zlepšení účinnosti translace), může být vybrán odpovídající způsob modifikace.

Yaohai Bio-Pharma jako první a největší CRDMO pro mikrobiální biologiku ve Velké Číně nabízí komplexní jednorázová řešení na míru nebo samostatné služby od syntézy RNA, kmenového inženýrství a konstrukce, upstream a downstream vývoje procesů až po GMP nebo jiné. -Výroba léčivých látek na úrovni GMP a služby plnění a dokončení pro různé modality, jako je mRNA, circRNA, plazmidová RNA, rekombinantní proteiny, peptidy, enzymy, jednodoménové protilátky a VLP pro humánní a veterinární použití.

Yaohai Bio-Pharma také aktivně hledá institucionální nebo individuální globální partnery a nabízí nejkonkurenceschopnější kompenzaci v oboru. Máte-li jakékoli dotazy, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]