Dnes je Yaohai tak vzrušující sdílet svůj in vitro transkriptový protokol pro dlouhou RNA. Je to účinná strategie, kterou vědci často používají k produkci RNA v laboratoři. Tímto způsobem mohou výzkumníci produkovat výrazně velké množství dlouhé RNA – něco zásadního pro studium v různých biologických oborech. Zde poskytujeme krok za krokem průvodce pro přípravu dlouhých RNA prostřednictvím in vitro transkripce. Budeme také mluvit o tom, jak bychom mohli tento proces vylepšit, a pokusíme se vyřešit některé problémy, kterým čelíte při syntéze dlouhé RNA.
Pro transkripci in vitro je vyžadováno několik základních složek, zejména dlouhá RNA. Budete muset poskytnout enzym zvaný RNA polymeráza, psací materiál ve formě nukleotidových trifosfátů (NTP), pufr na podporu reakce a nějaký templát DNA. Jak na to krok za krokem, podrobný návod najdete zde:
Pro správné fungování syntézy RNA je velmi důležitých několik faktorů. Nejdůležitější je množství hořčíkových iontů v samotném pufru. RNA polymeráza vyžaduje značné množství hořčíku k podpoře správné interakce s templátem DNA a následnému sbalení RNA. Druhým důležitým aspektem, který je třeba zvážit, je koncentrace templátu DNA. Konkrétně musíte mít dostatek templátové DNA reakce, abyste získali dobré výtěžky RNA.
Dlouhá RNA samozřejmě bude mít své vlastní problémy. Že tyto problémy mohou souviset s rozpadem RNA, ovlivnit, jak se RNA složí, a vybudovat struktury, které potenciálně interferují se syntézou RNA. Jedním ze způsobů, jak se s těmito problémy vypořádat, je vyladění vyrovnávací paměti, kterou si vezmete. Pro komplexnější strukturu RNA mohou vědci přidat různé speciální chemikálie, jako je DTT a p-merkaptoethanol, aby pomohly RNA se správně sbalit a zabránit tomu, aby se slepila nebo shlukovala.
Navíc ne všechny typy dlouhých RNA jsou stejné a některé mohou vyžadovat alternativní metody syntézy. Existují speciální funkce, které mohou výzkumníci potřebovat přidat do RNA, jako je přidání 5 čepice nebo Poly-A ocasu. Pokud je to potřeba (jak je vysvětleno později), pak by výzkumníci měli zahrnout další enzymy, jako je guanylyltransferáza a poly(A)polymeráza. Je také nutné vybrat vhodný RNA polymerázový enzym, který jim přirozeně umožňuje produkovat více RNA. Jakmile se bude muset syntetizovat dlouhá RNA, budeme muset identifikovat nejlepší stav.
Dlouhé RNA in vitro transkript Existuje řada klíčových použití pro protokol dlouhé RNA in vitro transkriptu v několika výzkumných, testovacích a terapeutických snahách. Pomáhá vědcům porozumět struktuře RNA, způsobu, jakým funguje a jak mohou pomocí současných technologií modifikovat geny. Další den – objev různých nemocí a jejich terapeutik, jako jsou velmi aktuální terapie RNA – věřme, jak užitečná může být tato technologie čtení pro medicínu.
Použití tohoto protokolu má mnoho výhod. Metoda založená na elektroforéze je obecně nejúčinnějším a nákladově nejefektivnějším způsobem produkce velkého množství dlouhé RNA. Kromě kvality RNA je důležitým faktorem pro výzkumníky také dobrý výtěžek, který jim pomáhá s výzkumem, zejména pokud potřebují velké množství RNA pro experimenty kvůli vysokému vstupnímu materiálu. Kromě toho je in vitro transkripce pro dlouhou RNA typicky přesnější a reprodukovatelnější než chemická syntéza nebo buněčná syntéza RNA.
Yaohai BioPharma je Top 10 mikrobiálních CDMO, které zahrnuje protokol in vitro transkriptu pro dlouhou RNA a také regulační záležitosti. Máme systém managementu kvality, který je v souladu se současnými normami GMP i globálními předpisy. Náš tým regulačních expertů je zběhlý v globálních regulačních rámcích pro urychlení biologických startů. Zajišťujeme sledovatelnost výrobních procesů kvalitních produktů, stejně jako dodržování pravidel US FDA a EU EMA. Spokojené jsou také Austrálie TGA a China NMPA. Společnost Yaohai BioPharma úspěšně prošla auditem kvalifikované osoby Evropské unie (QP) pro náš systém kvality GMP a také naše výrobní zařízení. Dále jsme absolvovali první certifikační audity systému managementu kvality ISO9001, systému environmentálního managementu ISO14001 a systému managementu bezpečnosti a ochrany zdraví při práci ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, 10 nejlepších výrobců biologických produktů, je specialistou na mikrobiální fermentaci. Založili jsme moderní zařízení, které je vybaveno moderním zařízením a silnými výrobními kapacitami RD. Máme pět linek na výrobu léčivých látek, které jsou v souladu s požadavky GMP pro mikrobiální fermentaci a purifikaci, a také dvě linky pro plnění-finiš, které jsou automatizované pro zásobníky, lahvičky i předplněné injekční stříkačky. Dostupné fermentační váhy se pohybují od 100L do 500L, 1000L a 2000L. Protokol in vitro transkriptu pro dlouhou RNA pro vias je 1 ml až 25 ml, zatímco předplněné injekční stříkačky a specifikace plnění kazet pokrývají 1-3 ml. Naše výrobní dílna je v souladu s cGMP a zaručuje stabilní dodávky klinických vzorků i komerčních položek. Náš závod produkuje velké molekuly, které jsou expedovány do celého světa.
Yaohai Bio-Pharma má zkušenosti s výrobou biologických přípravků, které jsou vytvořeny z mikroorganismů. Nabízíme řešení RD na míru a také výrobní služby při minimalizaci potenciálních rizik. Pracovali jsme s různými technikami, jako jsou rekombinantní buněčné podjednotky, vakcíny (včetně peptidů), růstové faktory, hormony a protokol in vitro transkriptu pro dlouhou RNA. Jsme specialisté na mnoho mikroorganismů, jako jsou kvasinková extracelulární a intracelulární sekrece (výtěžek až 15 g/l) a bakterie intracelulárně rozpustné a inkluzní tělíska (výtěžky až 10 g/l). Vyvinuli jsme také fermentační platformu BSL-2 pro vytvoření bakteriálních vakcín. Máme zkušenosti s vylepšováním výrobních procesů, čímž zvyšujeme výnosy a snižujeme náklady. Disponujeme vysoce výkonným technologickým týmem, který zajišťuje včasné a kvalitní dodání projektů. To nám pomáhá rychleji uvést na trh vaše jedinečné produkty.
Yaohai Bio-Pharma je předním výrobcem protokolu in vitro transkriptu pro CDMO s dlouhou RNA. Naším hlavním zaměřením byla výroba mikrobiálních vakcín a terapeutik pro léčbu domácích mazlíčků, zdraví lidí a zvířat. Vlastníme špičkové platformy RD a výrobních technologických platforem, které pokrývají celý výrobní proces od inženýrství mikrobiálních kmenů, přes zpracování buněčného bankovnictví a návrh metod až po klinickou a komerční výrobu, což zajišťuje, že můžeme zajistit úspěšnou dodávku nejpokročilejších řešení. Nashromáždili jsme obrovské množství znalostí v mikrobiální oblasti biologického zpracování. Bylo úspěšně dokončeno více než 200 projektů a my pomáháme našim klientům dodržovat předpisy, jako jsou předpisy amerického FDA a EU EMA. Pomáháme jim také orientovat se v Austrálii TGA a Číně NMPA. Díky našim zkušenostem a odborným znalostem jsme schopni rychle reagovat na požadavky trhu a nabízet služby CDMO na míru.