Раскрыццё сакрэтаў высакаякаснай экстракцыі плазмід

Вылучэнне плазміды мае вырашальнае значэнне для даследчыкаў. Як вектары генаў плазміды маюць жыццёва важнае значэнне ў даследаваннях вакцын і геннай тэрапіі, дзе якасць мае значэнне. Асноўныя фактары якасці ўключаюць прапорцыю звышспіралі і ўтрыманне эндатаксіну. Палажэнні вар'іруюцца: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, з <5% лінейнай/адкрытай кругавой ДНК. Кліенты часта аддаюць перавагу ≥95% Supercoiled. Узроўні эндатаксінаў: даследаванне (>50 EU/мкг), трансфекцыя (<50 EU/мкг) і без эндатаксінаў (<0.1 EU/мкг).

Суперскрученная плазмидная ДНК

Плазміды з Escherichia coli ўключаюць суперспіралізаваную (SC), адкрыта-кольцавую (OC) і лінейную (L) ДНК. Высокая доля SC павышае эфектыўнасць трансфекцыі і экспрэсію. Напрыклад, трансфекцыя 85.45% плазміды SC вышэйшая ў 2.5 разы, а экспрэсія HGF плазміды 93.28% SC вышэйшая ў 1.8 разы, што пацвярджае перавагу SC ДНК.

ДНК з адкрытым кругам: калі адзін ланцуг двухланцуговай ДНК разрываецца, суперскручаная структура становіцца друзлай, утвараючы плазміду з адкрытым кругам большага аб'ёму, якая найбольш павольна мігруе падчас электрафарэзу і размяшчаецца ўверсе.

Лінейная ДНК: калі абедзве ніткі плазміднай ДНК разрываюцца, утвараецца лінейная структура з адносна меншым аб'ёмам, які мігруе хутчэй, чым ДНК з адкрытым кругам, але павольней, чым суперспіральная ДНК, якая знаходзіцца на другім месцы.

Суперскрученная ДНК: дзве спіралі пераплятаюцца, скручваючыся ў суперспіральную структуру, заснаваную на спіралі ДНК. Ён мае найменшы аб'ём і найбольш хутка мігруе падчас электрафарэзу, размешчаны ўнізе.

Колькасны аналіз Supercoiled прапорцыі

У лабараторыях выкарыстоўваецца электрафарэз у агарозным гелі (AGE) і аналізатар Gel-Pro Analyzer для ацэнкі прапорцыі звышспіралі праз выявы электрафарэзу. Адзін малюнак паказвае 97.539% ДНК SC, а другі паказвае 63.833% SC і 36.167% ДНК OC (лінейная ДНК не бачная).

Сакрэт эндатаксіну ў плазмидах

Эндатаксін - гэта кампанент вонкавага пласта клеткавай сценкі грамотріцательных бактэрый, які вылучаецца пасля гібелі або лізісу бактэрый, змяшчае таксічны ліпапаліцукрыд А. Падчас экстракцыі плазміды эндатаксін трапляе ў раствор для лізісу, уплываючы на ​​эфектыўнасць трансфекцыі і запускаючы неспецыфічныя імунныя рэакцыі, што прыводзіць да ілжывых спрацоўванняў у эксперыментах.

Колькасны і якасны аналіз эндатаксінаў

Тэст Limulus amebocyte lysate (LAL) выяўляе эндатаксіны шляхам аглютынацыі з 2-кето-3-дезоксиоктоновой кіслатой (KDO) у ліпапаліцукрыдзе (LPS). Гэта якасны і паўколькасны, які паказвае на прысутнасць эндатаксіну ў выніку каагуляцыі або змены колеру пры змешванні з узорамі.

Кампанія Yaohai Bio-Pharma прапануе суперспіралізаваныя плазміды без эндатаксінаў. Аўтсорсінг Yaohai павышае эфектыўнасць трансфекцыі і экспрэсіі. Дастаўленыя плазміды маюць долю SC ≥95% (у сярэднім 85%±10%) і ўзроўні эндатаксінаў ≤0.1, ≤0.01 або ≤0.005 ЕС/мкг.

Мы таксама актыўна шукаем інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў. Мы прапануем найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас: [email protected]