Адкрыванне таямніц высоакачэснага выцягнення плазмід

Выкачка плазміда ў прынцыпах важная для даследчыкаў. Як вектары генаў, плазміды зagraльныя ў даследванні vakцын і генавай тэрапіі, дзе якасць мае значэнне. Ключавыя чыннікі якасці уключаюць удзел суперзавінутага і колькасць эндатоксінаў. Рэгуляцыі розныя: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, з <5% лінейнага/адкрыта-циклавога ДНК. Клієнты часта прадукаюць ≥95% суперзавінутага. Узроўні эндатоксінаў такія: даследвальная (>50 EU/µg), трансфекцыя (<50 EU/µg), і без эндатоксінаў (<0.1 EU/µg).

Суперзавінутая плазмідная ДНК

Плазміды ад Escherichia coli уключаюць суперзавінутую (SC), адкрыта-циклавую (OC) і лінейную (L) ДНК. Высокі удзел SC павышае эфектыўнасць трансфекцыі і выраз. Напрыклад, трансфекцыя 85.45% SC плазміду ёсць 2.5 разы вышэй, і выраз HGF для 93.28% SC плазміду ёсць 1.8 разы вышэй, пацверджваючы прыемущасці SC ДНК.

Адкрыта-кіркулавая ДНК: Колі пераўтвараецца адна нітка дванітковай ДНК, суперспіраная структура расцягваецца, узмацаваючы адкрыты кіркулавы плазмід большай вобласці, які рухаецца найменш шыбка ў дыэлектрафарэзе і знаходзіцца ў верхнім пазіцыі.

Лінейная ДНК: Колі абодві нітки плазміднай ДНК пераўтвараюцца, узмацаваецца лінейная структура з адносна меншай вобласцю, якая рухаецца шыбча за адкрыта-кіркулавую ДНК, але паўльней за суперспіраную ДНК, знаходзіцца на другім месцы.

Суперспіраная ДНК: Дзве спіралі пераплатаюцца, утвораючы суперспіраную структуру на базе спіралі ДНК. У яе самая малая вобласць, і яна рухаецца найшыбчэй падчас дыэлектрафарэзы, знаходзіцца ў доннім пазіцыі.

Колькасны аналіз пропорцыі суперспіранай ДНК

Лабараторыі выкарыстоўваюць агаровую гель-дыэлектрафарэзу (AGE) і Gel-Pro Analyzer для ацэнкі пропорцыі суперспіранай ДНК праз выявленне дыэлектрафарэзных выяў. Адна выя показуе 97.539% СДНК, а другая — 63.833% СДНК і 36.167% АДНК (лінейная ДНК не бачна).

Таеніцы эндатоксіну ў плазмідах

Эндотоксин з'яўляецца кампанентам знешняга шару клеткавай стэны грамадзіцых бактэрый, выдзеленых пасля бактэрыяльнага смерці ці ліза, які ўключает токсічную ліпапалісахарыду A. Падчас вылічэння плазмідаў эндотоксин уваходзіць у рашэнне лізацы, што ўплывае на эфектыўнасць трансфекцыі і спускае няспэцыфічныя імунныя адказы, прыводзячы да хибных пазітыўных вынікаў у даследваннях.

Колькасная і якасная аналітыка эндотоксіну

Тэст Лімulus amebocyte lysate (LAL) выявляе эндотоксин праз аглютацыю з 2-кето-3-дэоксіактанавай кіслінай (KDO) у ліпапалісахарыдзе (LPS). Ян якасны і паўколікасны, указваючы на наяўнасць эндотоксіну праз склерацію ці змену кольку, калі яго сумесціць з пробы.

Yaohai Bio-Pharma прапануе плазміды ў суперспіральнай канфігурацыі без эндотоксіну. Застосаванне сервісу Yaohai павышае эфектыўнасць трансфекцыі і экспрезіі. Достаўляемыя плазміды маюць ≥95% частку SC (у сярэднім 85%±10%) і роўень эндотоксіну ≤0.1, ≤0.01, ці ≤0.005 EU/μg.

Мы таксама актыўна шукаем глобальныя партнёраў — інстытуцый ці індывідуальных. Мы прапановаем най konkurencyjaснейшую кампенсацыю ў промысле. Калі у вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не сціліцеся з нами звязацца: [email protected]