Вытворчасць рэкамбінантнага бялку: сканструяваныя штамы E. coli

Кішачная палачка (E. coli) адыграла значную ролю ў вытворчасці рэкамбінантных бялкоў у біяфармацэўтычнай прамысловасці, служачы першым вектарам экспрэсіі для вытворчасці біялагічных лекаў. Сярод іншых пераваг кішачная палачка можа пахваліцца хуткім ростам, зручнай генетычнай маніпуляцыяй і хуткім сінтэзам рэкамбінантных бялкоў. Шырокія мадыфікацыі зрабілі E. coli аптымальным выбарам для экспрэсіі бялку, што прывяло да распрацоўкі розных сканструяваных штамаў E. coli.

Yaohai Bio-Pharma спецыялізуецца на прадастаўленні комплексных паслуг аўтсорсінгу для ферментацыі, ачысткі, распрацоўкі працэсаў рэцэптуры і вытворчасці серыі біяфармацэўтычных прэпаратаў з выкарыстаннем сістэм экспрэсіі E. coli. Што тычыцца шырокага вопыту Yaohai, мы рэзюмавалі, што чатыры распаўсюджаныя штамы E. coli выкарыстоўваюцца для вытворчасці рэкамбінантных бялкоў і іх асаблівасці.

Штам BL 21

Штам BL21, атрыманы з лініі E. coli B, не мае пратэазы Lon і пратэазы вонкавай мембраны OmpT. Пратэаза Lon у асноўным расшчапляе экзагенныя вавёркі, у той час як OmpT у асноўным расшчапляе вавёркі пазаклеткавага матрікса. Адсутнасць гэтых дзвюх ключавых пратэаз можа эфектыўна прадухіліць дэградацыю рэкамбінантных бялкоў.

Штам арыгамі

Штам Origami, вытворны E. coli K-12, мае мутацыі ў тыарэдаксінрэдуктазе і глутатыёнрэдуктазе, якія палягчаюць адукацыю правільна згорнутых бялкоў, якія змяшчаюць дысульфідныя сувязі, і павышаюць растваральнасць бялку. Штам Origami, уключаючы Origami, Origami 2 і Origami B, прыдатны для экспрэсіі актыўных бялкоў, якія змяшчаюць дысульфідныя сувязі.

Shuffle штам

Штам SHuffle канстытутыўна экспрэсуе ізамеразу дысульфіднай сувязі DsbC у цытаплазме, спрыяючы адукацыі правільных дысульфідных сувязяў у акісленых вавёрках. Ён таксама служыць малекулярным шаперонам для згортвання бялку, дапамагаючы ў фарміраванні правільнай канфармацыі.

Штам Rosetta

Штам Rosetta дапаўняе E. coli тРНК, якія адпавядаюць рэдкім кодонам, з мэтай паляпшэння ўзроўню экспрэсіі экзагенных генаў, асабліва эукарыятычных генаў, у пракарыётычных сістэмах. Атрыманы з BL21 і нясучы ўстойлівую да хлорамфеніколу плазміду pRARE, яна дапаўняе шэсць тРНК, якія адпавядаюць рэдкім кодонам (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC і GGA), якія першапачаткова адсутнічалі ў E. coli, забяспечваючы больш «універсальную» экспрэсію бялку.

Conclusion

Тры асноўныя фактары паспяховай вытворчасці рэкамбінантных бялкоў - гэта гаспадар, вектар і ўмовы культывавання. Грунтуючыся на разуменні фізіка-хімічных уласцівасцяў рэкамбінантнага бялку, унікальных пераваг кожнага штаму і канкрэтных патрэбаў эксперыменту, варта выбраць найбольш прыдатнага гаспадара. Акрамя таго, такія фактары, як плазмідныя вектары, тэмпература і індуктары, павінны быць аптымізаваны для павышэння экспрэсіі бялку.

Yaohai Bio-Pharma таксама актыўна шукае інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў і прапануе найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас: [email protected]