Аптымізацыя цэласнасці клетак E. coli для вытворчасці Biopharma

У галіне біяфармацэўтыкі Кішачная палачка (E. coli) адыгрывае жыццёва важную ролю ў якасці гаспадара для экспрэсіі рэкамбінантных бялкоў. Клеткавая цэласнасць E. coli мае вырашальнае значэнне для выхаду бялку, якасці і кошту вытворчасці. Гэтая цэласнасць у першую чаргу ўключае структуру і функцыі ўнутранай мембраны (IM) і вонкавай мембраны (OM).

Кампанія Yaohai Bio-Pharma 15 гадоў займаецца ферментацыяй кішачнай палачкі і экспрэсіяй рэкамбінантнага бялку. Мы выкарыстоўваем розныя стратэгіі для падтрымання высокай цэласнасці клетак E. coli, выхад плазміды перавышае 1 г/л на працягу 30-гадзіннага цыкла культывавання. Абапіраючыся на вялікі вопыт экспрэсіі мікробаў, Yaohai Bio-Pharma абагульніла некалькі эфектыўных стратэгій для маніторынгу і паляпшэння цэласнасці клетак кішачнай палачкі падчас біяфармацэўтычнай вытворчасці.

Метады маніторынгу цэласнасці клетак кішачнай палачкі

Праточная цытаметрыя: выкарыстоўвае флуоресцентные фарбавальнікі для дыферэнцыяцыі клетачных станаў, такія як прапідый ёдыд для выяўлення жыццяздольнасці клетак і SYTO9 для ацэнкі пранікальнасці OM. Аднак гэта патрабуе вялікіх выдаткаў на плямы і складаных аперацый.

Каларыметрычныя метады: адлюстроўваюць лізіс клетак шляхам вызначэння ўтрымання ДНК, актыўнасці ферментаў і г.д. у супернатанте, напрыклад, з дапамогай набору рэагентаў PicoGreen і аналізу актыўнасці шчолачнай фасфатазы. Гэтыя метады, аднак, грувасткія і патрабуюць дарагіх рэагентаў.

Высокаэфектыўная вадкасная храматаграфія: выкарыстоўваецца для аўтаномнага выяўлення канцэнтрацый пазаклеткавага прадукту для ацэнкі ўцечкі ОМ. Тым не менш, яго аўтаматызацыя складаная і час аналізу доўгі.

Метады вібрацыйнай спектраскапіі: такія як спектраскапія блізкага інфрачырвонага і сярэдняга інфрачырвонага дыяпазонаў, якія маюць патэнцыйнае прымяненне, але патрабуюць пераадолення праблем спектральных перашкод і аналізу даных.

Дыэлектрычная спектраскапія: ацэньвае цэласнасць мембраны шляхам вымярэння імпедансу клеткавых суспензій, дазваляючы анлайн-маніторынг у рэальным часе. Аднак ён успрымальны да перашкод, і каліброўка складаная.

Біясенсары: могуць выяўляць уцечку злучэнняў знутры клетак або перыплазмы, але сутыкаюцца з такімі праблемамі, як цяжкасці з рэгенерацыяй датчыка.

Вымярэнне глейкасці і шчыльнасці: нізкі кошт і хуткі аналіз, але не маюць селектыўнасці і патрабуюць разгляду дадзеных некалькіх партый для ацэнкі.

Фактары, якія ўплываюць на цэласнасць клетак

Штамная інжынерыя: змяняе цэласнасць OM з дапамогай геннай інжынерыі, напрыклад, мутацыі генаў ліпапратэінаў, але можа паўплываць на рост штаму.

Індукаваны стрэс: празмерная экспрэсія рэкамбінантных бялкоў прыводзіць да метабалічнай нагрузкі, уплываючы на ​​клеткавую фізіялогію. Такім чынам, неабходна разумнае рэгуляванне ўзроўню экспрэсіі.

Хуткасць падачы субстрата: Як празмерна высокая, так і нізкая хуткасць падачы ўплываюць на лізіс клетак і цэласнасць ОМ.

Тэмпература і аэрацыя: Высокія тэмпературы і нізкая даступнасць кіслароду павялічваюць стрэс экспрэсіі і ўцечку ОМ адпаведна, але спецыфічныя эфекты адрозніваюцца.

Асматычныя сродкі: выкарыстоўваюцца для вызвалення перыплазматычных бялкоў, але пашкоджваюць жыццяздольнасць клетак, абмяжоўваючы іх прымяненне.

Выснова Будучыя даследаванні павінны паглыбіцца ў механізмы і ўмовы аднаўлення мембран, каб дакладна кантраляваць цэласнасць клеткавай мембраны. Чакаецца, што аптымізацыя метадаў маніторынгу і аналіз фактараў, якія ўплываюць, палепшаць якасць прадукцыі, што спрыяе развіццю біяфармацэўтычнай прамысловасці.

Мы таксама актыўна шукаем інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў. Мы прапануем найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас па адрасе [email protected]