Аптымізацыя целаснасці клетак E. coli для праўядзення у біяфармацеўтыцы

У сферы біяфармацеўтыкаў, Эшерычыя колі (E. coli) грае асноўную ролю як хост для экспрэсіі рэкомбінантных белкаў. Кліточная цэласціна E. coli знойдзена для выдачы белка, якасці і затрат на праўядзенне. Гэта цэласціна ў першую чаргу уключае структуру і функцыю внешняй мембраны (IM) і знешняй мембраны (OM).

Yaohai Bio-Pharma мае 15 гадоў досвіду ў ферментацыі E. coli і экспрэсіі рэкомбінантных белкаў. Мы карыстаемся рознымі стратэгіямі, каб захоўваць високую кліточную цэласціна E. coli, выдача плазміда прывышае 1г/Л у працэсе культывання тр伐цай 30 гадзін. Спрыямаючы шырокаму дасведку ў мікробіяльнай экспрэсіі, Yaohai Bio-Pharma абобщыла некалькі эфектыўных стратэгій для маніторынга і падзейнення кліточнай цэласці E. coli падчас біяфармацеўтскага праўядзення.

Тэхнікі для маніторынга кліточнай цэласці E. coli

Цитаметрыя праміення: Выкарыстоўвае флуорэсцэнтныя краскі для дыферэнцыяцыі клетачных станаў, такіх як пропідыум йод для выявлення жыццяспасабнасці клетак і SYTO9 для ацэнкі праніцаемасці ЗЧ. Правядзенне гэтай мэтады каштуе драгія краскі і ўключае складаныя аперацыі.

Калірометрычныя метады: Адбіраюць клетачную лізісу праз выявленне ДНК-зместу, энзымных актыўнасцей і інш., у супернатыце, напрыклад, з выкарыстаннем набора рэagens PicoGreen і тэsta на актыўнасць алкаліннай фосфатазы. Гэтыя метады, аднак, вяртаюць бурмістую працэдуру і каштоўную рэagens.

Высоцкаэфектыўная цыдачная хроматаграфія: Выкарыстоўваецца для авалідацыйнага вызначэння канцэнтрацый выметальных produkтаў для ацэнкі праніцаемасці ЗЧ. Пры гэтым, яе автоматызацыя складаная і час аналізу дае вынік у дужа паўльшым часе.

Вібрацыйная спектраскопія: Напрыклад, бляжняправая і сярэдняяправая спектраскопія, якая мае потэнцыяльныя зastosаванні, але патрабуе перамогчы спектральную інтэрферынцыю і выклікае складаныя задачы аналізу danych.

Діэлектрычная спектраскопія: Ацэндзюе цэласнасць мембран праз памер імпедэнцыі клеткавых суспензый, дазваляючы рэалізаваць маніторынг у рэжыме рэал-час. Праводзёны, яно ўязліва да памешанняў і калібравка складаная.

Біасэнсары: Могуць выявіць злучэнні, якія выліліся з клетак ці перыплазмы, але маюць праблемы, такія як затрудненне рэгенерацыі сэнсара.

Памеры вісказі і густины: Нізкае зацэнаў і швидкі аналіз, але не маюць выбару і патрабуюць ўлічвання многабачных дадзеных для суду.

Фактары, якія ўплывалі на клетковую цэласнасць

Генаўная інжынерыя: Змяняе цэласнасць ЗШ праз генаўную інжынерыю, напрыклад, мутацыю ліпапротэінавых генаў, але можа ўплываць на рост штама.

Індукаваны стрэс: Перавышенне экспрезіі рекамбінантных белкаў прыводзіць да метаболічнага барацу, які ўплывает на фізіалагію клеткі. Таму неабходна разумнае рэгулюванне ўзроўню экспрезіі.

Спід кормлення падложкам: Клічуцца абодва занадта вышэйшыя і ніжэйшыя спіды кормлення, якія ўплывалі на лізіс клетак і цэласнасць ЗШ.

Тэмпература і аэрацыя: Высокі тэмпературы і нізкі ўмовы даступнасці кислорода збягчай заўвагодзяць экспрэсію стрэсу і выцэкае МД, адпаведна, але спецыфічныя эфекты розніца.

Асмотыка: Ужываецца для выдадзення перыплазматычных белкаў, але шкадзяць жыццёспасабнасці клеткі, што абмежоўвае іх прымененне.

Вывад: Будучыя даследаванні павінны глыбей заходзіць у механізмы і ўмовы рагулявання мембран, каб складзена ўпарадкуваць целаўную цэль мембраннай цэліснасці. Аптымізацыя метадаў маніторынга і аналіз чыннікаў, якія маюць ўпачатак, спадзевается павялічыце якасць праducts, што прыводзіць да развіцця біяфармацевтычнай пралесі.

Мы таксама шукаем глабальных партнёраў — інстытуцый ці індывідаў. Мы прапановаем найвышую кампенсацыю ў галіне. Калі ёсць якія-небудзь пытанні, не сцісніцеся звязацца з намі [email protected]