Інавацыйныя метады зборкі для буйнамаштабнага сінтэзу генаў

Тэхналогія зборкі для сінтэзу вялікіх фрагментаў ДНК з нуля з'яўляецца краевугольным каменем сінтэзу генаў, ахопліваючы такія метады, як BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, зборка Gibson, CPEC і Overlap PCR. З-за абмежаванняў сучасных тэхналогій у дакладным сінтэзе ДНК з геннай даўжынёй за адзін этап неабходна камбінаваць метады зборкі in vitro і in vivo для зборкі фрагментаў алігануклеатыдаў, сінтэзаваных у сегментах, у доўгія фрагменты ДНК.

Тэхніка зборкі in vitro

Яны класіфікуюцца на розныя метады на аснове памеру фрагмента і характарыстык паслядоўнасці з агульным патрабаваннем да выкарыстання інструментальных ферментаў. ПЦР з перакрыццем, заснаваная на метадзе ДНК-полимеразы, простая і хуткая ў працы. Метады BioBrick і BglBrick, якія абапіраюцца на ізашызамеры, дазваляюць стандартызаваць зборку, хаця метад BioBrick непрыдатны для злітых бялкоў. Метад кланавання Golden Gate, заснаваны на ферментах рэстрыкцыі тыпу IIS, дазваляе эфектыўна бясшвоўна звязваць некалькі фрагментаў. Метад зборкі Гібсана, які выкарыстоўвае камбінацыю некалькіх інструментальных ферментаў, дазваляе бясшвоўна перавязваць з памерамі фрагментаў, якія дасягаюць некалькіх сотняў кб. Стандартызаваны дызайн кампанентаў ДНК павышае хуткасць выкарыстання існуючых фрагментаў.

Тэхніка зборкі in vivo

Хоць прабірцы сабраныя фрагменты могуць дасягаць памеру некалькіх сотняў кб, выхад часта недастатковы, што патрабуе ампліфікацыі з дапамогай такіх арганізмаў, як Кішачная палачка. Для зборкі фрагментаў памерам больш за 20 кб часта выкарыстоўваюцца рэкамбінантныя сістэмы ўнутры арганізмаў, у тым ліку Bacillus subtilis, дрожджы і створаныя бактэрыі. Дрожджы, як звычайна выкарыстоўваны гаспадар, на працягу многіх гадоў былі прызнаны сваёй эфектыўнай здольнасцю да гамалагічнай рэкамбінацыі. Яго можна выкарыстоўваць для зборкі штучных храмасом даўжынёй да некалькіх мегабаз (Mb). Акрамя таго, Saccharomyces cerevisiae дэманструе незвычайную талерантнасць да даўжыні храмасом, што з'яўляецца тэарэтычнай асновай для выкарыстання дрожджаў для пабудовы звышдоўгіх храмасом у вышэйшых арганізмах.

прыкладанняў

Кампанія Yaohai Bio-Pharma у асноўным выкарыстоўвае два метады зборкі для сінтэзу генаў: зборку лігаз і зборку ДНК-палімеразы. Метад зборкі лігазы злучае перакрываюцца і гібрыдызаваныя фрагменты 5'-фасфарыляваных алігануклеатыдаў у двухланцуговую ДНК з дапамогай ДНК-лігазы. Палімеразны метад зборкі выкарыстоўвае ДНК-палімеразу для пашырэння перакрываючыхся алігануклеатыдных фрагментаў шляхам гібрыдызацыі, атрымання сумесі рознай даўжыні і, нарэшце, ампліфікацыі паспяхова сабраных поўнаметражных фрагментаў з дапамогай праймераў. Yaohai можа дапамагчы кліентам задаволіць пэўныя патрабаванні ў сінтэзе генаў.

Мы таксама актыўна шукаем інстытуцыйных або індывідуальных глабальных партнёраў. Мы прапануем найбольш канкурэнтаздольную кампенсацыю ў галіны. Калі ў вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не саромейцеся звяртацца да нас: [email protected]