Інавацыйныя тэхнікі зборкі для масштабнага сінтэза гена

Тэхналогія збіркі для синтезу вялікіх фрагментаў ДНК ад нуля ўжыwaецца як асноўнае засаб у сінтэзі генаў, уключыўшы метады, такія як BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC і Overlap PCR. У звязку з абмежаваннямі сучаснай тэхналогіі ў дакладным сінтэзе ДНК генавай даўжыні за адзін крок, неабходна kombіраваць тэхнікі in vitro і in vivo, каб збіраць олигонуклеатыдныя фрагменты, сінтэзованыя часткамі, у вялікія фрагменты ДНК.

Тэхнікі збіркі in vitro

Дзеля іх класіфікацыі існуе некалькі метадаў, якія залежать ад памеры фрагментаў і характарыстык секвенцыі, з агульным умовам выкарыстання інструментальных энзымоў. Перекрыццовая PCR, якая спасці на методзе DNA-полімеразы, мае простую і швидкую аперацыю. Метады BioBrick і BglBrick, якія залежаць ад ізашызамараў, дазваляюць стандартную асамблевку, хоць метад BioBrick не ўключаная для фузнічных белкаў. Метад Golden Gate клонінга, які спасці на тэйпах IIS рэстрыкцыйных энзымоў, дазваляе эфектыўнае бязшваватое лігаванне некалькіх фрагментаў. Метад Gibson Assembly, які выкарыстоўвае камбінацыю некалькіх інструментальных энзымоў, дазваляе бязшваватое лігаванне з памерам фрагментаў да некалькіх сотак kb. Стандартаўная дэзынацыйнасць DNA-кампанентаў павышае касцёўнасць існуючых фрагментаў.

Тэхнікі асамблевкі ў жывой сярэдзе

Хоць у клетцы размір асамбліраваных фрагментаў можа дасягнуць некалькіх сотак kb, часта вынік недастатны, што неабходна для ампліфікацыі з дапамогай арганізаваных стварэнняў, таких як Escherichia coli. Пры збірцы фрагментаў, якія перавышаюць 20 кб, часта выкарыстоўваюцца рекамбінацыйныя сістэмы ўнутры арганізмаў, уключынна Bacillus subtilis, дріжджовага гібрыда і інжынерных бактэрый. Дріжджы, як часта выкарыстоўванны хазяін, вядомы сваім эфектыўным спосабам гамалогічнай рэкамбінацыі працягласцю многа гадоў. Яны могуць выкарыстоўвацца для збіркі штучных хромасом да некалькіх мегабаз (Mb) у даеўжыні. Кропка С Saccharomyces cerevisiae выказвае незвыкласную талерантнасць да даеўжыні хромасом, што дае тэарэтычную базу для выкарыстання дріжджоў прадстаўнікам высшых арганізам, каб сконструявана ўльтра-далгія хромасомы.

Застосаванні

Yaohai Bio-Pharma галоўным чынам выкарыстоўвае два метады збіркі для сінтэзасці гена: злучэнне лігазай і злучэнне ДНК-полімеразай. Метад лігазнага злучэння спалучае перакрываючыяся і гібрыдныя 5'-фосфатаваныя олигонуклеатыдныя фрагменты ў двуспіральную ДНК з дапамогай ДНК-лігазы. Метад полімеразнага злучэння выкарыстоўвае ДНК-полімеразу, каб пашырыць перакрываючыяся олигонуклеатыдныя фрагменты праз гібрыдацыю, атрымліваючы сумесці розных даўжынаў, і на кансцае этапе удвояць паспяхова збітыя цалыя фрагменты з дапамогай прамер. Yaohai можа дапамагчы клієнтах задавальняць спецыфічныя патрабаванні пры сінтэзасці гена.

Мы таксама актыўна шукаем глобальныя партнёраў — інстытуцый ці індывідуальных. Мы прапановаем най konkurencyjaснейшую кампенсацыю ў промысле. Калі у вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не сціліцеся з нами звязацца: [email protected]