Bună. V-ați întrebat vreodată cum pot oamenii de știință să cloneze un ARN? ARN-ul este această moleculă specială pe care o găsim în celulele noastre, care face o grămadă de lucruri pentru a produce proteine, iar proteinele sunt acolo, astfel încât corpul nostru să poată face toate lucrurile potrivite. În această tranșă, vom face o prezentare a protocolului mult mai curios folosit de cercetători: transcrierea in vitro. Și tot ceea ce înseamnă că oamenii de știință iau ARN și fac mult din el într-o eprubetă (care este acest borcan mic pe care îl folosesc laboratoarele), așa că haideți să treceți la fiecare pas aici.
După ce am terminat postarea mea anterioară, mi-am dat seama că ultima poate să fi fost un pic de postări uscate-veniți-ună-te-distracție-în-laborator-umed; deci, în conformitate cu forma, acum că sunteți bine și cu adevărat în trenul distractiv (sic ARN-making): Ce reactivi andc vor avea nevoie pentru EF dvs.? Pentru a realiza acest lucru, vom avea nevoie de proteine speciale numite enzime, identice cu produsul Yaohai Producția Midkine recombinantă. Catalizează reacțiile chimice, aceste enzime ajută la descompunere. Așa că acum avem nevoie doar de un pic de ADN. Această funcție este ADN-ul pe care îl folosim ca șablon pentru a copia pentru ARN-ul nostru. Sunt necesare și secvențe reglatoare suplimentare în ARN, și anume nucleotide. Aceste nucleotide sunt ca niște blocuri de construcție minuscule care trebuie asamblate pentru a face ARN. De asemenea, folosim tuburi scurte cu diametru mic pentru a încheia evaluarea gustului în altele. În cele din urmă, avem nevoie de o mașină (un termociclator) care să se asigure că reacțiile noastre sunt la temperatura potrivită. În plus, este posibil să avem nevoie de câteva instrumente și produse pentru anumite experimente.
Deci aici lucrurile diverg, avem o catenă de ARN și acum ne place să avem mai multe copii ale acesteia, de asemenea Fabricarea de vaccinuri VLP conjugate dezvoltat de Yaohai. Modul de a realiza utilizarea unei alte enzime; ARN polimeraza T7. Această enzimă unică, de exemplu, recunoaște zone specifice din ARN. un con de săritură pentru a face mai multe copii ale ARN-ului în procedură. În acest moment, mai multe vor fi adăugate la catena de ARN de către ARN polimeraza T7 până când se creează o masă de transcript sau până când îi spunem să se oprească.
După ce am izolat ARN-ul cât mai mult posibil, derulați mai jos pentru a vedea cum să curățăm și să stocăm ARN-ul pentru utilizare ulterioară. Rhoades: Unele dintre aceste metode sunt puțin mai extreme în ceea ce privește izolarea ARN-ului - nu ați folosi întotdeauna asta, dar uneori este nevoie pentru anumite tipuri de experiment. Odată ce ARN-ul nostru este liber de orice contaminant, poate fi depozitat înghețat. În acest fel, acesta este sigur și îl putem folosi ulterior în diferite experimente.
Calitatea materialului de pornire: asigurați-vă că șablonul dvs. de ADN este curat și nu ars. De asemenea, puteți suplimenta cu nucleotide proaspăt reconstituite și enzime proaspăt dezghețate pentru a maximiza șansele unui experiment de succes.
Condiții de reglare fină Toate enzimele și nucleotidele lor funcționează mai bine la o anumită temperatură și pH în interiorul corpului tău, precum și Yaohai. ARNm roșu fluorescent. Acum ajustați puțin nuanța între condiții până când ajungeți acolo unde este cheia configurației dvs. unice.
Reverse transcriptaza este o enzimă neobișnuită, deoarece face o copie a ADN-ului dintr-o moleculă de ARN. Am folosit atât ADN, cât și un șablon ADN (ADNc) ca intrare pentru metoda noastră de transcriere in vitro pentru generarea de ARN. Cu toate acestea, în majoritatea experimentelor, oamenii de știință ar dori să transcrie ADN-ul în ARN. Transcrierea inversă este locul în care își primește numele la fel ca Testarea distribuției ARNm poli-A realizat de Yaohai. Este un instrument de neprețuit în întreaga știință - de la studierea moleculelor de ARN din interiorul celulelor până la producerea de catenele complementare de ADN pentru experimente ulterioare.
Experimente din viața reală în care ARN-ul este unul dintre cele mai frecvent utilizate instrumente moleculare, împreună cu produsul Yaohai Producția de vaccin VLP în E. coli. Teste cantitative: Aceste teste pot dezvălui cantitatea oricărei molecule specifice prezente într-o probă. De exemplu, oamenii de știință pot sintetiza un preparat de transcriere in vitro de copii ARN derivate dintr-o genă țintită situată într-o celulă. Diagnosticul poate apoi testa acele copii, în cazul în care acestea sunt. în căutarea ARN, diagnosticul poate rula o reacție în lanț a polimerazei (PCR) pentru a amplifica acele copii într-un exemplu. Acest lucru face posibil ca oamenii de știință să vadă modul în care genele sunt exprimate pe celule și chiar permite unele teste de debit extrem de ridicat, cum ar fi prezența unei infecții bacteriene sau virale, și să diagnosticheze tulburările genetice.
Protocolul de transcriere in vitro este lider în CDMO în domeniul biologic microbian. Accentul nostru s-a concentrat pe vaccinurile și medicamentele produse cu microbi care sunt potrivite pentru managementul sănătății umane, veterinare și animale de companie. Avem cele mai de ultimă oră platforme RD și tehnologie de producție care acoperă întreaga procedură, începând cu dezvoltarea tulpinilor microbiene și a băncilor de celule, până la dezvoltarea proceselor și metodelor, până la producția comercială și clinică, care asigură livrarea cu succes a soluțiilor inovatoare. De-a lungul timpului, am acumulat cunoștințe vaste despre bioprocesarea pe bază de microbi. Peste 200 de proiecte au fost finalizate cu succes și ne ajutăm clienții să respecte reglementări precum cele ale US FDA și UE EMA. De asemenea, îi ajutăm să navigheze în Australia TGA și China NMPA. Expertiza noastră profesională și experiența vastă ne permit să răspundem rapid la cerințele pieței și să oferim servicii CDMO la comandă.
Yaohai Bio-Pharma are experiență în producția de produse biologice create din Protocolul de transcriere in vitro. Oferim soluții personalizate de RD și de producție, asigurându-ne în același timp că nu există riscuri. Am fost implicați în diverse modalități, cum ar fi vaccinuri subunități recombinante, hormoni peptidici, citokine, factori de creștere, enzime cu anticorpi cu un singur domeniu, ADN-ul MRNA plasmidic și multe altele. Suntem specialisti in multe microorganisme, inclusiv in secretia intracelulara si extracelulara de drojdie (randament de pana la 15 g/L), precum si in bacterii intracelulare solubile si de incluziune (randament pana la 10 g/L). De asemenea, am creat o platformă de fermentație BSL-2 pentru a crea vaccinuri bacteriene. Ne concentrăm pe îmbunătățirea proceselor, creșterea randamentului produselor și reducerea costurilor de producție. Folosind o echipă tehnologică puternică, putem asigura livrarea promptă și fiabilă a proiectelor, care vă va aduce produsul pe piață mai rapid.
Yaohai Bio-Pharma, un top 10 producător de produse biologice, este specializat în fermentarea microbiană. Am construit o instalație modernă cu capabilități solide de RD și echipamente avansate. Avem cinci linii de fabricare a substanțelor medicamentoase care se conformează cerințelor GMP pentru fermentarea și purificarea microbiană. Avem, de asemenea, două linii automate de umplere-finisare pentru cartușe, flacoane și seringi preumplute. Cântarele de fermentație disponibile pentru utilizare variază de la Protocolul de transcriere in vitro până la 2000L. Specificațiile pentru umplerea unui flacon variază de la 1 ml până la 25 ml. Specificațiile de umplere a seringii preumplute sau a cartuşului variază de la aproximativ 1-3 ml. Unitatea noastră de producție compatibilă cu cGMP asigură furnizarea constantă de mostre clinice, precum și articole comerciale. Planta noastră produce molecule mari care sunt expediate pe glob.
Yaohai BioPharma este un Top 10 CDMO microbian care încorporează protocolul de transcriere in vitro, precum și afaceri de reglementare. Avem un sistem de management al calității care este în conformitate cu standardele actuale GMP, precum și cu reglementările globale. Echipa noastră de experți în reglementare este competentă în cadrele de reglementare globale pentru a accelera lansările biologice. Asigurăm procese de producție trasabile produse de calitate, precum și respectarea regulilor FDA din SUA și EMA UE. Australia TGA și China NMPA sunt, de asemenea, mulțumite. Yaohai BioPharma a trecut cu succes auditul la fața locului al Persoanei Calificate (QP) a Uniunii Europene pentru sistemul nostru de calitate GMP, precum și pentru unitatea noastră de producție. În plus, am aprobat primele audituri de certificare ale Sistemului de management al calității ISO9001, Sistemului de management al mediului ISO14001 și Sistemului de management al sănătății și siguranței în muncă ISO45001.