În procesul de preparare a ARNm de transcripție in vitro (IVT), ADN-ul plasmidic linearizat este necesar ca matriță de transcripție pentru IVT cu ajutorul ARN polimerazei T7. ADN-ul plasmidic de înaltă calitate este crucial pentru transcripția in vitro.
Bazat pe platforma de servicii de pregătire a plasmidelor mature, Yaohai Bio-Pharma poate oferi un serviciu de preparare a ADN-ului plasmidic liniarizat de puritate ridicată și standard înalt pentru a obține o transcripție IVT eficientă.

Detalii despre servicii
Proces |
Service optional |
Detalii despre servicii |
Perioada de livrare (zi lucrătoare) |
Prepararea plasmidelor circulare |
Sinteza genelor |
Sinteza genică (terță parte) |
7-10 |
Amplificarea plasmidei |
Amplificarea plasmidei |
2 |
Extracția plasmidelor |
Prepararea plasmidei liniarizate |
Linearizarea și purificarea plasmidelor |
Linearizarea plasmidelor |
1 |
Linearizare purificare ADN |
Controlul calității ADN-ului plasmidic |
Puritatea concentrației |
Spectrofotometrie ultravioletă (UV). |
1-2 |
Conformația plasmidică |
Electroforeză pe gel de agaroză (AGE) |
Electroforeză capilară (CE)-opțional |
Identificarea plasmidei |
Identificarea enzimei de restricție/ AGE |
Caracteristicile noastre
- Plasmid șablon de tăiere liberă
Selectarea flexibilă a metodelor de liniarizare
- Rată ridicată de recuperare
Optimizarea metodelor de extracție și purificare a ADN-ului pentru a obține rate ridicate de recuperare.
- Control strict al calității
Standarde stricte de control al procesului, cu o rată de conformare superhelicală a probelor de plasmide pentru cercetare de peste 80%.
- Procesul platformei mature
Servicii de pregătire și control al calității plasmide la standarde înalte și de înaltă eficiență pentru a satisface nevoile experimentale.
Studiu de caz
Luând ca exemplu produsul mRNA_luciferase din catalogul Yaohai Bio-Pharma, eșantionul de plasmidă șablon de transcripție (grad de cercetare) are un raport superhelical de peste 90%, un raport de liniarizare aproape de 100% și un raport de transcriere ulterior de până la 1:200 ( ADN plasmid linearizat: ARNm).
ARNm_luciferaza obţinută prin prepararea unei plasmide linearizate ca matriţă este transfectată în celule 293T, iar activitatea reacţiei enzimă-substrat este evaluată la 24 de ore după transfecţie.
Poate fi detectat un semnal puternic de activitate a luciferazei, adică proteina luciferază este exprimată eficient, ceea ce sugerează că puritatea matriței de transcripție poate satisface pe deplin cerința de preparare a ARNm de înaltă calitate.

Testul raportului de plasmide supercoiled

Validarea expresiei ARNm a luciferazei in vitro