Prepararea CircRNA necesită RNA liniar ca material precursor (precursor RNA) pentru ciclizare, unde precursorul RNA este de obicei pregătit folosind DNA plasmidic linearizat drept șablon de transcripție și transcris in vitro cu ajutorul polimerazei T7 RNA.
Un DNA plasmidic de înaltă calitate este esențial pentru transcripția in vitro (IVT). Pe baza platformei de servicii maturate de preparare a plasmidului, Yaohai Bio-Pharma poate oferi un serviciu de pregătire a DNA-ului plasmidic linearizat de înaltă puritate și standard pentru a asigura integritatea produselor IVT.
Detalii Servicii
| Procesul |
Serviciu Opțional |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (zi de lucru) |
| Prepararea Plasmidei Circulare |
Sinteza genetică |
Sinteză de Gene (Tertă) |
7-10 |
| Amplificare Plasmid |
Amplificare Plasmid |
2 |
| Extracție Plasmid |
| Prepararea Plasmidului Linearizat |
Liniarizare și purificare a plasmidei |
Liniarizarea plasmidului |
1 |
| Purificare ADN Linearizat |
| Controlul calității DNA-ului plasmidic |
Concentrație și puretate |
Spectrofotometrie Ultravioletă (UV) |
1-2 |
| Conformațiune plasmid |
Electroforeză în Gel de Agaroză (AGE) |
| Electroforesă Capilară (CE) - Opțional |
| Identificare a Plasmidului |
Identificare enzyme de restricție / AGE |
Caracteristicile noastre
Selecție flexibilă a metodelor de linearizare
- Rata ridicată de recuperare
Optimizarea metodelor de extracție și purificare a ADN-ului pentru a obține rate ridicate de recuperare.
- Controlul Calității Riguroase
Standarde stricte de control al procesului, cu o rată de conformațiune supereliculară a eșantironilor de plasmid destinați cercetării de peste 80%.
Servicii de pregătire și control calitativ al plasmidului la standarde ridicate și cu eficiență ridicată pentru a satisface nevoile experimentale.
Studiu de caz
Luând ca exemplu produsul mCherry circRNA al Yaohai Bio-Pharma, raportul de superînrolare al eșanturilor de plasmid templet de transcripție (grad de cercetare) este de peste 70%, cu o rată de linearizare apropiată de 100%.
mCherry circRNA este preparat folosind plasmid linearizat ca templet și este transfecționat în celulele 293T. După 24 de ore de transfecție se detectează o expresie fluorescentă la nivel ridicat (fluorescență roșie), care va fi intensificată la 48 de ore, și poate încă fi detectată la a șaptea zi și a patra săptămâna după transfecție.
proteina mCherry este exprimată în mod stabil și eficient, iar pureitatea templetului de transcripție poate să satisfacă cerințele medicamentului circRNA de calitate ridicată (DP).
Validarea expresiei in vitro a mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
