revopsirea extremului 5' este o modificare esențială a mRNA. mRNA cu structuri de cap, în special structurile de Cap1, ajută la evitarea răspunsurilor imune innate in vivo, ceea ce duce la o traducere eficientă a proteinelor.
Revopsirea enzimatică (metoda în două pași) este metoda convențională de revopsire a mRNA, similară procesului de revopsire din organismele eucariote. Sub acțiunea unei serie de enzyme, 7-metilguanina (m7G) este legată de extremitatea 5'-a a mRNA prin intermediul unui legământ trifosfat 5'-5' și subiectează o modificare de metilare pentru a forma structura de cap Cap 1 (m7GpppN).
Diagrama formării structurii naturale de cap
Scopul fluxului de reacție de revopsire enzimatică este următorul:
ADN plasmid linearizat este folosit ca șablon pentru transcripție in vitro (IVT) în prezența polimerazei T7, iar mRNA cu o structură de cap la extremitatea 5' se formează după o purificare într-o singură etapă folosind enzimul de capping vaccinia și 2'-O-metiltransferaza.
Detalii Servicii
Serviciu Opțional |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (Zi) |
închidere enzymatică mRNA |
Reacție de capping enzymatic |
1 |
Optimizare a reacției de capping - opțional |
Proiectare și optimizare componentă a reacției |
3~7 |
Caracteristicile noastre
- Proiectarea și optimizarea componentelor de reacție de capping
Componenta de reacție de capping este optimizată, iar producția de transcript mRNA este marescută semnificativ.
- Verificare a expresiei in vitro
MRNA cu cap este transfecționat în celulele 293T, iar expresia proteinului țintă poate fi detectată.
Prin controlul riguros al RNase-elor din mediul experimental și consumabile, degradarea mRNA este prevenită eficient.
Studiu de caz
Platforma mRNA a Yaohai Bio-Pharma a dezvoltat un proces perfect de reacție de cappare.
Pentru mRNA eGFP, un pre-produs mRNA pregătit prin cappare enzymatică, după transfecția celulelor 293T timp de 24 de ore, se poate observa un semnal de fluorescență eGFP (fluorescență verde) la un nivel ridicat, care este detectat prin Western Blot (WB), demonstrând că proteina țintă, proteina fluorescentă verde intensificată (eGFP), poate fi exprimată eficient in vitro.
Expresia mRNA eGFP Capată Enzimatic în Celulele 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
