Comparativ cu capparea enzymatică în două pași, metoda de capare co-transcripțională într-un singur pas poate reduce semnificativ fluxul procesului. Metoda este orientată spre rezultat și implică adăugarea analogilor de cap la reacția de transcripție in vitro (IVT). Analogii de cap pot fi introduse la începutul transcripției, iar mRNA cu structura de cap poate fi obținut la finalizarea transcripției. Analogii de cap generația curentă a treia pot evita capparea inversă și pot adăuga direct structura Cap 1 produsului de transcripție.
Pentru considerente legate de imunogenicitatea mRNA in vivo și eficiența traducerii, procesul IVT adoptă adesea anumite tipuri de NTP-uri modificate, iar nucleotidele modificate comune sunt pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) și 5-metilcitozina (5mC).
Figura: Diagramă a Reacției de Co-transcripție și Capare mRNA
Detalii ale Serviciului
Serviciu |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (zi de lucru) |
Capare co-transcripțională |
Răspuns transcripcional in vitro (analog Clean Cap) |
1-2 |
| Modificări ale nucleotidilor (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Eliminarea șablonului DNA (DNase I) |
Optimizare condiții IVT - opțional |
Proiectare și optimizare componentă a reacției |
3-7 |
Caracteristicile noastre
- Strategii Diversificate de Modificare a Nucleotidilor
Multiple strategii opționale de modificare a nucleotidilor pot îmbunătăți expresia proteinică.
- Sistem de Reacție Optimizat
Obțineți un raport ridicat de transcripție și o eficiență ridicată de capping.
Atingeți o rată de încăpere de peste 95%.
Preveniți degradarea mRNA în mod eficient prin controlul riguros al RNase în mediul experimental și consumabile.
Studiu de caz
Yaohai Bio-Pharma a dezvoltat o platformă matură pentru procesul de încăpere co-transcrițională, folosind cap analog curat pentru a adăuga direct structura Cap1, evitând în același timp încăperea inversă. După prelucrarea standardizată a eșantionului și detecția prin electroforeză capilară (CE), rata de încăpere a mRNA-ului proteinei fluorescente verzi enhance (eGFP) poate atinge peste 95%.
eficiența de încăpere a mRNA-ului eGFP de peste 95%
MRNA-ul eGFP și mRNA-ul mCherry pregătite prin încăpere co-transcrițională sunt transfecate în celulele 293T, respectiv, și se observează un semnal fluorescent puternic după 48 de ore, sugerezând că mRNA-ul este exprimat cu eficiență în celulele 293T.
Expresia mRNA-ului eGFP și mRNA-ului mCherry în celulele 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
