În ceea ce privește producția în masă a mRNA, transcripția in vitro (IVT) este o metodă mai eficientă și mai bine dezvoltată. Reacția IVT utilizează un plasmid DNA linearizat care conține promotorul T7 ca templet, iar mRNA este sintetizat cu nucleoside trifosfatice (NTP-uri) ca substanțe de bază în prezența polimerazei RNA T7.
Modificarea nucleotidului reprezintă o prăbușire în explorarea mRNA, unde moleculele de mRNA ne-modificate sunt recunoscute de senzori de RNA intra celulari pentru a activa imunitatea innată. Pentru considerente legate de imunogenicitatea mRNA in vivo și eficiența de traducere, procesul IVT utilizează de obicei anumite tipuri de NTP-uri modificate, iar nucleotidele modificate comune sunt pseudouriadină (Ψ), N1-metil-pseudouriadină (N1Ψ) și 5-metil-citozină (5mC).
Procesul de Transcripție In Vitro al mRNA
Diagramă a reacției de transcripție in vitro (IVT)
Detalii Servicii
Serviciu Opțional |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (zi de lucru) |
Transcrierea in vitro (IVT) |
IVT, Transcripție in vitro |
1 |
| Modificări de nucleotide (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Eliminarea șablonului DNA (DNase I) |
Optimizare condiții IVT - opțional |
Proiectare și optimizare componentelor reacției IVT |
2-5 |
Caracteristicile noastre
- Strategii Diversificate de Modificare a Nucleotidilor
Îmbunătățește stabilitatea mRNA și expresia proteinelor in vivo.
- Proiectare Riguroasă a Testelor și Optimizare
prepararea fragmentului mRNA poate fi realizată până la 10kb.
Prin optimizarea condițiilor de reacție IVT, rata de transcriere este până la 1:200.
Controlul stric al RNase prin intermediul mediului experimental și consumabilelor poate preveni eficient degradarea mRNA.
Studiu de caz
Sistemul de reacție IVT actual este aproximativ optimizat pentru sisteme sintetice cu o lungime de aproximativ 100 nt, nu pentru mRNA-uri de orice lungime. Cu cât secvența mRNA este mai lungă, cu atât este mai dificil de transcris și mai predispusă la degradare.
Pentru a pregăti secvențe personalizate de mRNA cu o lungime de aproximativ 10 kb, Yaohai Bio-Pharma a reușit să pregătească probe de înaltă calitate cu un raport de transcripție ridicat de 1:135 și a obținut 135 μg de produse mRNA purificate inițial după ce 1 μg de plasmid linearizat a fost transcris in vitro printr-o concepție experimentală riguroasă, optimizarea continuă a condițiilor de reacție și controlul strict al RNase.
identificare mRNA (Eletroforeză pe Gele de Agaroză)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
