Yaohai Bio-Pharma pregătește circRNA bazat pe sistemul PIE (alinierea exonilor și intronilor), care se bazează pe funcția de auto-splicing a intronilor de tip I pentru a realiza ciclizarea RNA. Structura PIE este proiectată folosind genul T4 td sau precursorul tRNA de pește, iar aranjamentul este următorul:
Intronul RNA și fragmentul de exon suport sunt împărțiți în două părți (terminala 5' și terminala 3'), unde secvența terminală 5' este transferată la coada secvenței țintă, secvența terminală 3' este inserată în fața secvenței țintă, iar secvența genului țintă este inserată în mijloc.
Sub catalizația GTP, structura PIE duce la ciclizarea secvențelor diferite de introni. Combinată cu o strategie rațională de creștere a ratei de ciclizare, Yaohai Bio-Pharma poate realiza ciclizarea secvențelor până la 4 kb cu o rată de ciclizare mai mare de 80%.
Figura 1. Circulația in vitro a circRNA bazată pe sistemul PIE
Detalii Servicii
| Procesul |
Serviciu Opțional |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (zi de lucru) |
| proiectare și optimizare a secvențelor circRNA |
Proiectare și optimizare a secvențelor codante |
Alinierea secvenței CDS
Optimizarea codonilor secvenței CDS
|
1 |
| Proiectare și optimizare a secvențelor necodificatoare |
Proiectarea și optimizarea secvențelor de introni și exoni
Proiectare și optimizare a secvenței de braț homolog
Proiectare și optimizare a secvenței de spațiu
|
1-2 |
Strategii Comune pentru Proiectarea Secvenței mRNA
| Componente CircRNA |
Funcții Biologice |
Strategii de Optimizare |
| Secvențe de intron și exon terminal |
Auto-splicing al intronului catalizat de GTP pentru ciclizarea secvențelor din afara intronului. |
Proiectat în funcție de genul T4 td sau precursorsul tRNA al uleiului de pește. |
| codare |
IRES |
Loc de recunoaștere intern al ribozomului care reglementează traducerea circRNA. |
Screening al secvențelor de intrare a ribozomului intern (IRES) din surse virale diferite, de exemplu EMCV, surse CVB3. |
| CDS |
Regiuni codante proteine, secvențe codante pentru antigeni, anticorpi sau alte proteine functionale. |
Optimizarea codonilor crește nivelul de traducere; anumiti codoni ne-optimi pot juca un rol în plierea proteinelor. |
| Ne-codant |
Secvențe ne-codante |
A ținta miRN-urilor sau proteinelor pentru a exercita reglarea genelor sau a proteinelor. |
A ținta siturilor de legare specifice pentru miRNA sau proteine poate să repete secvențele sitului de legare. |
Caracteristicile noastre
- Sistem optimizat de ciclizare PIE combinat cu strategii de optimizare raționale pentru a obține o rată de ciclizare de peste 80%;
- Echipa de Optimizare CDS cu tehnologie de frontieră colaboră cu o echipă de algoritmi AI profesioniști pentru a finaliza optimizarea codonilor din regiunea CDS;
- Procesul circRNA madur și perfect poate fi realizat cu o eficiență ridicată de ciclizare, stabilitate înaltă și eficiență de traducere crescută.
Studiu de caz
Yaohai Bio-Pharma a lansat produsul de control proteina fluorescentă verde intensificată (eGFP) circRNA, care se bazează pe sistemul PIE pentru a realiza ciclizarea RNA.
Folosind un reagent de transfecție convențional, circRNA eGFP este transfecat în celulele 293T, iar semnalul fluorescent eGFP (verde) poate fi detectat la 24 de ore, urmând să se întărească la 48 de ore. Semnalul fluorescent poate încă fi detectat la a șaptea zi și a patrașprezecea zi după transfecție.
Validare a expresiei in vitro a circRNA eGFP
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
