Wat de massaproductie van mRNA betreft, is in vitro transcriptie (IVT) een efficiëntere en volwassener methode. De IVT-reactie gebruikt gelineariseerd plasmide-DNA dat de T7-promoter als matrijs bevat, en mRNA wordt gesynthetiseerd met nucleosidetrifosfaten (NTP's) als substraten in de aanwezigheid van T7-RNA-polymerase.
Nucleotidemodificatie is een doorbraak in de verkenning van mRNA, waarbij ongemodificeerde mRNA-moleculen worden herkend door intracellulaire RNA-sensoren om de aangeboren immuniteit te activeren. Uit overwegingen van mRNA in vivo immunogeniciteit en translatie-efficiëntie maakt het IVT-proces gewoonlijk gebruik van bepaalde soorten gemodificeerde NTP's, en veel voorkomende gemodificeerde nucleotiden zijn pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) en 5-methylcytosine (5mC).
In vitro transcriptieproces van mRNA
In vitro transcriptie (IVT) reactiediagram
Dienstendetails
Optionele dienst | dienst Details | Leveringsperiode (werkdag) |
In vitro transcriptie (IVT) | IVT, in vitro transcriptie | 1 |
| Nucleotidemodificaties (Ψ/N1Ψ/5mC, enz.) |
| Verwijdering van DNA-sjabloon (DNase I) |
IVT-conditieoptimalisatie - optioneel | Ontwerp en optimalisatie van IVT-reactiecomponenten | 2-5 |
Onze kenmerken
- Gediversifieerde strategieën voor nucleotidemodificatie
Verbeter de mRNA-stabiliteit en eiwitexpressie in vivo.
- Rigoureus testontwerp en optimalisatie
Bereiding van mRNA-fragmenten tot 10 kb kan worden bereikt.
Door de IVT-reactieomstandigheden te optimaliseren, bedraagt de transcriptiesnelheid maximaal 1:200.
- Strenge controle van RNase
Strenge controle van RNase via een experimentele omgeving en verbruiksartikelen kan de afbraak van mRNA effectief voorkomen.
Casestudies
Het huidige IVT-reactiesysteem is grofweg geoptimaliseerd voor synthetische systemen met een lengte van ongeveer 100 nt, niet voor mRNA's van willekeurige lengte. Hoe langer de mRNA-sequentie, hoe moeilijker het is om te transcriberen en hoe gevoeliger het is voor afbraak.
Om op maat gemaakte mRNA-sequenties met een lengte van ongeveer 10 kb te bereiden, heeft Yaohai Bio-Pharma met succes monsters van hoge kwaliteit bereid met een hoge transcriptieverhouding van 1:135 en 135 μg aanvankelijk gezuiverde mRNA-producten verkregen na 1 μg gelineariseerd plasmide werd in vitro getranscribeerd door middel van een rigoureus experimenteel ontwerp, continue optimalisatie van reactieomstandigheden en strikte controle van RNase.
mRNA-identificatie (Agarosegelelektroforese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
