De producten die worden verkregen door in vitro cyclisatie en RNase R-verrijking moeten verder worden verwijderd uit in vitro transcriptie (IVT), inclusief niet-geconsumeerde substraten in de cyclisatiereactie, reactiebijproducten en gekerfd RNA.
Yaohai Bio-Pharma beschikt over volwassen LiCl-precipitatie, magnetische parelzuivering, zelfontwikkelde zuivering en andere gediversifieerde zuiveringsoplossingen om verschillende onzuiverheden effectief te verwijderen en zeer zuiver circRNA te bereiden.
Zuiveringsoplossing voor kleine hoeveelheden circRNA voor celtransfectie en als onderdeel van dierproeven.
Zuiveringsoplossing voor kleine hoeveelheden circRNA voor celtransfectie en als onderdeel van dierproeven.
Toepassingsscenario's met hogere kwaliteit;
Stabiel en schaalbaar zuiveringsproces om te voldoen aan de GMP-productievereisten.
Proces | Optionele dienst | dienst Details | Leveringsperiode (dag) | Deliverables |
circRNA-zuivering | Conventionele zuiveringsoplossing | Neerslag van lithiumchloride | 1 | circRNA-medicijnsubstantie |
Magnetische parelzuivering | ||||
Zeer zuivere circRNA-zuivering | Preparatieve hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) | 1-2 | ||
Buffer uitwisseling | Ultrafiltratie | 1 | ||
circRNA-kwaliteitscontrole | Concentratie/zuiveren | Ultraviolette (UV) spectrofotometrie | 0.5 | Test rapport |
Zuiverheid | Agarosegelelektroforese (AGE)/E-gel | |||
HPLC-optioneel | 1 |
Toepassingsscenario's kunnen worden gerealiseerd.
circRNA met een zuiverheid van meer dan 90%;
Door strenge controle van RNasen in de experimentele omgeving en verbruiksartikelen wordt RNA-afbraak effectief voorkomen.
Yaohai Bio-Pharma heeft een volwassen circRNA-zuiveringsoplossing ontwikkeld die verschillende procesgerelateerde onzuiverheden effectief kan verwijderen.
De circulaire RNA-producten die door de conventionele oplossing worden gezuiverd, zijn duidelijk nog steeds gemengd met gekerfd RNA en introns.
Na de door Yaohai Bio-Pharma ontwikkelde zuiveringsoplossing kunnen verschillende lineaire RNA-onzuiverheden, zoals gekerfd RNA en introns, met succes worden verwijderd.
circRNA-expressievalidatie
Met behulp van een conventioneel liposoom wordt gezuiverd eGFP-circRNA getransfecteerd in 293T-cellen en wordt na 24 uur een fluorescentiesignaal waargenomen dat na 48 uur nog steeds wordt versterkt. Het fluorescentiesignaal kan nog steeds worden gedetecteerd op de 7e dag en de 14e dag na transfectie.