Bij het bereidingsproces van in vitro transcriptie (IVT) mRNA is gelineariseerd plasmide-DNA nodig als transcriptiesjabloon voor IVT met behulp van T7-RNA-polymerase. Plasmide-DNA van hoge kwaliteit is cruciaal voor in vitro transcriptie.
Gebaseerd op het volwassen serviceplatform voor plasmidevoorbereiding, kan Yaohai Bio-Pharma een gelineariseerde plasmide-DNA-bereidingsservice van hoge zuiverheid en hoge standaard aanbieden om efficiënte IVT-transcriptie te bereiken.
Dienstendetails
| Proces | Optionele dienst | dienst Details | Leveringsperiode (werkdag) |
| Preparaat van circulaire plasmiden | Gen synthese | Gensynthese (derden) | 7-10 |
| Plasmide-amplificatie | Plasmide-amplificatie | 2 |
| Plasmide-extractie |
| Gelineariseerde plasmidebereiding | Plasmide-linearisatie en -zuivering | Linearisatie van plasmiden | 1 |
| Linearisatie DNA-zuivering |
| Kwaliteitscontrole van plasmide-DNA | Concentratie zuiverheid | Ultraviolette (UV) spectrofotometrie | 1-2 |
| Plasmide conformatie | Agarosegelelektroforese (AGE) |
| Capillaire elektroforese (CE)-optioneel |
| Plasmide identificeren | Identificatie van restrictie-enzymen/AGE |
Onze kenmerken
Flexibele selectie van linearisatiemethoden
Optimalisatie van DNA-extractie- en zuiveringsmethoden om hoge terugwinningspercentages te bereiken.
- Strenge kwaliteitscontrole
Strenge procescontrolenormen, met een superhelisch conformatiepercentage van plasmidemonsters voor onderzoek van meer dan 80%.
Hoogwaardige en zeer efficiënte plasmidevoorbereiding en kwaliteitscontrolediensten om aan experimentele behoeften te voldoen.
Casestudy
Als we het mRNA_luciferase-product uit de Yaohai Bio-Pharma-catalogus als voorbeeld nemen, heeft het plasmidemonster van de transcriptiesjabloon (onderzoekskwaliteit) een superhelische verhouding van meer dan 90%, een linearisatieverhouding van bijna 100% en een daaropvolgende transcriptieverhouding tot 1:200 ( gelineariseerd plasmide-DNA:mRNA).
Het mRNA_luciferase verkregen door de bereiding van een gelineariseerd plasmide als matrijs wordt getransfecteerd in 293T-cellen en de enzym-substraatreactieactiviteit wordt 24 uur na transfectie geëvalueerd.
Er kan een duidelijk sterk luciferase-activiteitssignaal worden gedetecteerd, dat wil zeggen dat het luciferase-eiwit efficiënt tot expressie wordt gebracht, wat erop wijst dat de zuiverheid van de transcriptiematrijs volledig kan voldoen aan de eis van mRNA-bereiding van hoge kwaliteit.
Supercoiled Plasmid Ratio-test
Validatie van luciferase-mRNA-expressie in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
