capping aan het 5'-eind is een essentiële modificatie van mRNA. mRNA met capstructuren, vooral Cap1 structuren, helpen mRNA om in vivo innate immuunreacties te ontwijken, wat resulteert in efficiënte eiwitvertaling.
Enzymatische capping (de twee-staps methode) is de traditionele methode voor mRNA capping, vergelijkbaar met het capping proces in eukaryotische organismen. Onder invloed van een reeks enzymen wordt 7-methylguanine (m7G) gekoppeld aan het 5'-eind van mRNA via een 5'-5' triphosphaatbinding en ondergaat methylatie modificatie om de capstructuur Cap 1 (m7GpppN) te vormen.
Schema van de vorming van de natuurlijke capstructuur
De stroom van de enzymatische capping reactie is als volgt:
Lineair gemaakt plasmid-DNA wordt gebruikt als sjabloon voor in vitro transcriptie (IVT) in aanwezigheid van T7-polymerase, en mRNA met een 5' end-cap structuur wordt gevormd na een eenstaps zuivering met behulp van het vaccinia capping enzym en 2'-O-methyltransferase.
Service Details
Optionele Diensten |
Service Details |
Leveringstermijn (dagen) |
mRNA Enzymatische Capping |
Enzymatische capping reactie |
1 |
Optimalisatie van de capping reactie - optioneel |
Ontwerp en optimalisatie van de reactiecomponenten |
3~7 |
Onze functies
- Ontwerp en optimalisatie van de capping reactiecomponenten
De capping reactiecomponenten worden geoptimaliseerd, en de productie van mRNA-transcripten neemt sterk toe.
- In vitro expressieverificatie
Het gegapte mRNA wordt getransfereerd in 293T-cellen, en de expressie van het doel eiwit kan worden gedetecteerd.
- Streng controle van RNase
Door streng beheer van de RNases in het experimentele milieu en de verbruiksartikelen wordt effectief voorkomen dat mRNA afbreekt.
Gevalstudie
Het mRNA-platform van Yaohai Bio-Pharma heeft een perfect capping-reactieproces ontwikkeld.
Voor eGFP mRNA, een mRNA-preproduct bereid door enzymatisch capping, kan na transfectie van 293T-cellen gedurende 24 uur een hoog niveau van eGFP fluorescentiesignaal (groene fluorescensie) worden waargenomen, wat wordt gedetecteerd door Western Blot (WB), wat aantoont dat het doel eiwit, enhanced green fluorescent protein (eGFP), efficiënt in vitro wordt uitgedrukt.
Uitdrukking van enzymatisch gecapte eGFP mRNA in 293T-cel
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
