De basis van de encapsulatie is de ontwerp en ontwikkeling van het leveringsysteem. Een goed ontworpen leveringsysteem laat circRNA-moleculen het lichaam in gaan zonder door RNA-enzymen te worden gedegradeerd en vervolgens effectief naar de doellocatie te worden geleverd, het celmembran over te steken en intracellulair te worden vrijgegeven.
Lipid nanopartikels (LNPs) zijn het beste beschikbare leveringssysteem, met voordelen op het gebied van encapsulatie, in vivo expressie en in vivo veiligheid vergeleken met andere leveringssystemen. LNPs met nucleïnezuurfragmenten worden gemakkelijk opgenomen door cellen en vormen intracellulaire lichamen. Nadat ze de cel zijn binnengegaan, protoneren de zuurhoudende omstandigheden van het intracellulaire lichaam en laden de kop van het ioniserende vet positief, waardoor deze fuseert met de binnenste membran van het intracellulaire lichaam en het doelwitnucleïnezuur vrijgeeft in de cel voor actie.
De circRNA-service van Yaohai Bio-Pharma blijft zich ontwikkelen en kan een circRNA-LNP encapsulatieservice bieden om relevante kritieke procesparameters te optimaliseren en de consistentie en herhaalbaarheid van circRNA-medicijnproductie te verbeteren.
Proces | Service Details | Leveringstermijn (dagen) | Leveranties |
circRNA-LNP Encapsulering | Materiaal- en vloeistofvoorbehandeling | 2 | circRNA-LNP medicijnproduct (DP) |
Microfluidic Device Mengen | |||
Tangentieel stroomfiltering | 1 | ||
Sterilisatiefiltering | |||
circRNA-LNP kwaliteitscontrole | Encapsulatie-efficiëntie | 1 | Testrapport |
Deeltjesgrootte en Polydispersiteitsindex | |||
Zetapotentiaal |
Snel synthesis, hoge R&D efficiëntie en voor-geoptimaliseerde oplossingen;
Het encapsuleringsverhaal kan meer dan 90% bedragen;
De grootte van lipid nanopartikels kan worden beheerd door de vloeistofinjectiesnelheid en -verhouding aan te passen;
circRNA-LNP producten worden gevalideerd door in vitro celexpressie en kunnen het doelwit eiwit efficiënt uitdrukken.
LNP-eGFP circRNA-monsters worden voorbereid en verschillende doseringen hiervan (1ug, 2ug en 4ug) worden rechtstreeks getransfereerd naar 293T cellen om te verifiëren of ze het doelwit eiwit kunnen uitdrukken. Na 48 uur transfusie kan een duidelijk fluorescerend signaal worden waargenomen, en is er een dosis-escalerend effect op de fluorescentie-intensiteit.
Lipo-circ_eGFP, bestaande uit liposomen en niet ingekapseld eGFP circRNA, wordt gebruikt als controle.