Wat de massa-productie van mRNA betreft, is in vitro transcriptie (IVT) een efficiëntere en volwassenere methode. De IVT-reactie gebruikt lineariseerd plasmid-DNA dat de T7-promotor bevat als sjabloon, en mRNA wordt gesynthetiseerd met nucleoside triphosphates (NTPs) als substraten in aanwezigheid van T7 RNA-polymerase.
Nucleotide-modificatie is een doorbraak in het onderzoek naar mRNA, waarbij niet-gemodificeerde mRNA-moleculen worden herkend door intracellulaire RNA-sensoren om de aangeborene immuniteit te activeren. Om rekening te houden met de in vivo immunogeniteit van mRNA en de vertaal-efficiëntie, maakt het IVT-proces gewoonlijk gebruik van bepaalde soorten gemodificeerde NTPs, en gangbare gemodificeerde nucleotiden zijn pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) en 5-methylcytosine (5mC).
In Vitro Transcriptieproces van mRNA
Schematische weergave van de in vitro transcriptie (IVT)-reactie
Service Details
Optionele Diensten |
Service Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
Transcriptie in vitro (IVT) |
IVT, In vitro transcriptie |
1 |
| Nucleotiden modificaties (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| DNA-sjabloon verwijdering (DNase I) |
Optimalisatie van IVT-condities - optioneel |
Ontwerp en optimalisatie van IVT-reactiecomponenten |
2-5 |
Onze functies
- Verscheiden Nucleotide Modificatie Strategieën
Verbeter de stabiliteit van mRNA en eiwitsynthese in vivo.
- Strikt Testontwerp en Optimalisatie
de voorbereiding van mRNA-fracties tot 10kb kan bereikt worden.
Door de IVT-reactiecondities te optimaliseren, is de transscriptiesnelheid tot 1:200.
- Streng controle van RNase
Strenge controle van RNase door middel van een experimentele omgeving en verbruiksartikelen kan effectief mRNA-degradatie voorkomen.
Gevalstudie
Het huidige IVT-reactiesysteem is ongeveer geoptimaliseerd voor synthetische systemen met een lengte van ongeveer 100 nt, niet voor mRNA's van willekeurige lengte. Hoe langer de mRNA-sequentie, des te moeilijker is het om te transcriberen en des te gevoeliger is het voor degradatie.
Om aangepaste mRNA-sequenties met een lengte van ongeveer 10 kb voor te bereiden, heeft Yaohai Bio-Pharma succesvol hoge-kwaliteitsmonsters voorbereid met een hoge transcriptieratio van 1:135 en verkregen 135 μg van oorspronkelijk gezuiverde mRNA-producten nadat 1 μg van gelineaireerd plasmid in vitro was getranscribeerd door streng experimenteel ontwerp, continue optimalisatie van reactiecondities en strikte controle van RNase.
mRNA identificeren (Agarose Gel Electrophorese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
