Bij de batchbereiding van RNA-prestaties wordt een vaak gebruikte methode in vitro transcriptie (IVT). De IVT-reactie gebruikt gelinieariseerd plasmid-DNA met de T7-promotor als sjabloon en synthetiseert een RNA-precursor met nucleoside triphosphates (NTP's) als substraat in aanwezigheid van T7 RNA-polymerase.
Methoden voor in vitro cyclisatie omvatten chemische ligatie, enzymatische ligatie en de permuted intron-exon (PIE)-methode. Chemische ligatie en enzymatische ligatie zijn geschikt voor de cyclisatie van kortere RNAs. Wanneer het fragment groter is dan 100 nt, neemt de cyclisatiesnelheid sterk af. In tegenstelling daaraan kan de nucleasemethode gebaseerd op het PIE-systeem cyclisatie van 8 kb sequenties bereiken.
Onder de katalyse van guanosinetrifosfaat (GTP) ondergaat de PIE-structuur cyclisatie van extra-intron sequenties. In combinatie met een redelijke strategie om de cyclisatie snelheid te verhogen, kan Yaohai Bio-Pharma cyclisatie bereiken van sequenties tot 4 kb, met een cyclisatie efficiëntie van meer dan 80%.
De in vitro cyclisatie reactie van RNA verloopt als volgt:
Het RNA-prekursor wordt gesynthetiseerd door in vitro transscriptie, en het PIE-component voltooit zelf-splicing onder de katalyse van GTP om circRNA te vormen.
Service Details
| Proces |
Service Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
| In vitro Transcriptie en Circulatie |
Reactiesysteembevestiging |
1-2 |
| In Vitro Transcriptie- en Cyclisatierecties |
| RNase R Digestie |
| Reactie optimalisatie |
Reactiecompositie, Tijdsoptimalisatie |
2-5 |
Onze functies
- Strikt Testontwerp en Optimalisatie
Cyclisatie van tot 4 kb RNA kan bereikt worden.
- Hoge cyclisatie-efficiëntie
Een cyclisatiesnelheid van meer dan 80% kan bereikt worden door een rationele sequentieoptimalisatiestrategie.
- Streng controle van RNase
Door strikte controle van RNases in het experimentele milieu en de verbruiksartikelen wordt effectief voorkomen dat RNA afbreekt.
Gevalstudie
In vitro cyclisatie en verrijking van circRNA
Op basis van het PIE-systeem heeft Yaohai Bio-Pharma de sequentie van circRNA geoptimaliseerd, met een cyclisatiesnelheid van meer dan 80% zoals bepaald door agarose-gel elektroforese (AGE). Door gebruik te maken van RNase R om circRNA te verrijken, tonen E-gel elektroforese-resultaten aan dat het lineaire RNA-precursor is gededisseerd, en na verdere zuivering kan de meeste gedeeltelijk gesloten circRNA verwijderd worden. De zuivoplossing is zelf ontwikkeld door Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cyclisatie en verrijking van circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
