Wat betreft de batchbereiding van RNA-voorlopers is in vitro transcriptie (IVT) een veelgebruikte methode. De IVT-reactie maakt gebruik van gelineariseerd plasmide-DNA dat de T7-promoter als matrijs bevat en synthetiseert een RNA-voorloper met nucleosidetrifosfaten (NTP's) als substraat in de aanwezigheid van T7-RNA-polymerase.
In vitro cyclisatiemethoden omvatten chemische ligatie, enzymatische ligatie en gepermuteerde intron-exon (PIE) -methode. Chemische ligatie en enzymatische ligatie zijn geschikt voor de cyclisatie van kortere RNA's. Wanneer het fragment groter is dan 100 nt, zal de cyclisatiesnelheid sterk afnemen. Daarentegen kan de nucleasemethode gebaseerd op het PIE-systeem cyclisatie van sequenties van 8 kb bereiken.
Onder de katalyse van guanosinetrifosfaat (GTP) ondergaat de PIE-structuur cyclisatie van extra-intronsequenties. Gecombineerd met een redelijke strategie om de cyclisatiesnelheid te verhogen, kan Yaohai Bio-Pharma cyclisatie tot 4 kb sequenties bereiken, met een cyclisatie-efficiëntie van meer dan 80%.
De in vitro cyclisatiereactie van RNA verloopt als volgt:
De RNA-precursor wordt gesynthetiseerd door in vitro transcriptie, en de PIE-component voltooit de zelfsplitsing onder de katalyse van GTP om circRNA te vormen.
Dienstendetails
| Proces | dienst Details | Leveringsperiode (werkdag) |
| In vitro transcriptie en circulatie | Bevestiging van het reactiesysteem | 1-2 |
| In vitro transcriptie- en cyclisatiereacties |
| RNase R-vertering |
| Optimalisatie van de reactie | Reactiesamenstelling, tijdoptimalisatie | 2-5 |
Onze kenmerken
- Rigoureus testontwerp en optimalisatie
Er kan tot 4 kb RNA-cyclisatie worden bereikt.
- Hoge cyclisatie-efficiëntie
Een cyclisatiepercentage van meer dan 80% kan worden bereikt via een rationele strategie voor sequentieoptimalisatie.
- Strenge controle van RNase
Door strenge controle van RNasen in de experimentele omgeving en verbruiksartikelen wordt RNA-afbraak effectief voorkomen.
Casestudy
In vitro cyclisatie en verrijking van circRNA
Op basis van het PIE-systeem heeft Yaohai Bio-Pharma de sequentie van circRNA geoptimaliseerd, met een cyclisatiesnelheid van meer dan 80% door agarosegelelektroforese (AGE). Met behulp van RNase R om circRNA te verrijken, laten de resultaten van E-gel-elektroforese zien dat de lineaire RNA-voorloper wordt verteerd en dat na verdere zuivering het grootste deel van het gekerfde circRNA kan worden verwijderd. De zuiveringsoplossing is zelf ontwikkeld door Yaohai Bio-Pharma.
In vitro circulatie en verrijking van circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
