Yaohai Bio-Pharma bereidt circRNA voor op basis van het PIE-systeem (uitlijning van exonen en intronen), wat leunt op de zelf-splicing functie van type I introns om RNA-cyclisatie te realiseren. De PIE-structuur wordt ontworpen met behulp van het T4 td-gen of het visachtige tRNA-precursor-gen, en de indeling is als volgt:
Het RNA-intron en het ondersteunende exongedeelte worden verdeeld in twee delen (5' terminaal en 3' terminaal), waarbij de 5' terminale sequentie wordt overgedragen naar het einde van de doelsequentie, de 3' terminale sequentie wordt ingevoegd voor de doelsequentie, en de doelgeensequentie wordt in het midden geïnsert.
Onder de katalyse van GTP leidt de PIE-structuur tot de cyclisatie van sequenties die niet corresponderen met introns. In combinatie met een redelijke strategie voor het verbeteren van de cyclisatiesnelheid kan Yaohai Bio-Pharma cyclisatie bereiken van sequenties tot 4 kb met een cyclisatiefrequentie van meer dan 80%.
Figuur 1. In vitro cyclisatie van circRNA gebaseerd op het PIE-systeem
Service Details
| Proces |
Optionele Diensten |
Service Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
| circRNA sequentiëringontwerp en optimalisatie |
Ontwerp en optimalisatie van coderende sequenties |
CDS sequentieuitlijning
CDS Codon Optimalisatie
|
1 |
| Ontwerp en optimalisatie van niet-coderende volgordes |
Intron en exon sequentieontwerp en optimalisatie
Ontwerp en optimalisatie van homologe arm sequenties
Ontwerp en optimalisatie van spacer sequenties
|
1-2 |
Gemeenschappelijke strategieën voor mRNA-sequentieontwerp
| CircRNA-componenten |
Biologische functies |
Optimalisatiestrategieën |
| Tweeterminal intron- en exonsequenties |
GTP-gecatalyseerde intron zelf-splicing voor cyclisatie van sequenties buiten het intron. |
Ontworpen volgens de T4 td-gene of de visolie tRNA-precursor-gene. |
| Codering |
IRES |
Interne ribosoomherkenningssite die de vertaling van circRNA reguleert. |
Screening van interne ribosoomentrysites (IRES)-sequenties uit verschillende virale bronnen, bijv. EMCV, CVB3 bronnen. |
| CDS |
Proteïne-coderende gebieden, sequenties die coderen voor antigenen, antilichamen of andere functionele proteïnen. |
Codonoptimalisatie verhoogt het niveau van vertaling; bepaalde niet-optimale codons kunnen een rol spelen in de vouwing van proteïnen. |
| Niet-coderend |
Niet-coderende sequenties |
Doel miRNAs of proteïnen om gen- of proteïneregulatie uit te oefenen. |
Richten op specifieke bindingsplaatsen voor miRNAs of proteïnen kan de sequenties van de bindingsplaats herhalen. |
Onze functies
- Goptimaliseerd PIE Cyclisatiesysteemcombinatie met redelijke optimalisatiestrategieën om een cyclisatieratio van meer dan 80% te bereiken;
- Scherpe CDS Optimalisatie Team Samenwerking met een professioneel AI algoritme team om de optimalisatie van CDS regio codons af te ronden;
- Volwassen en Perfect Proces circRNA kan bereikt worden met een hoge cyclisatie efficiëntie, hoge stabiliteit en hoge vertaalefficiëntie.
Gevalstudie
Yaohai Bio-Pharma lanceerde het controleproduct versterkte groene fluorescerende eiwit (eGFP) circRNA, dat gebaseerd is op het PIE systeem om de cyclisatie van RNA te realiseren.
Met behulp van een conventioneel transfectiereagens wordt eGFP circRNA getransfereerd in 293T cellen, en na 24 uur kan er een eGFP (groen) fluorescerend signaal gedetecteerd worden, dat na 48 uur versterkt wordt. Het fluorescerende signaal kan nog steeds gedetecteerd worden op de 7e dag en de 14e dag na transfectie.
In vitro expressievalidatie van eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
